一、目的
為證實在進(jìn)行四個以上數(shù)量級進(jìn)行定量時, LC/MS/MS的樣品殘留量可降低至可測得的水平以下。
二、背景
現(xiàn)今質(zhì)譜儀的靈敏度已經(jīng)能夠?qū)崿F(xiàn)跨五個數(shù)量級的檢測，且柱上進(jìn)樣量的定量下限可低至阿克級。要使高性能質(zhì)譜儀的靈敏度不斷增加，也要求LC系統(tǒng)上的樣品交叉污染達(dá)到最低，以優(yōu)化分析性能。
有關(guān)驗證跨多個數(shù)量級的生物分析方法的規(guī)范通常要求最高濃度校準(zhǔn)品的樣品殘留量不多于最低濃度校準(zhǔn)品的20%。1因此，為使校準(zhǔn)范圍跨四個數(shù)量級，必須使樣品殘留量低至0.002%以下。
若校準(zhǔn)范圍在四個數(shù)量級以上，則必須使交叉污染減少至更低的水平。通常，隨著對柱上進(jìn)樣量交叉污染的要求不斷嚴(yán)格，系統(tǒng)污染變得非常關(guān)鍵。LC系統(tǒng)及方法必須能夠重復(fù)地將分析物自進(jìn)樣器、管道及色譜柱上去除，以使每次進(jìn)樣都沒有交叉污染。
在對奧美拉唑進(jìn)行分析時，Xevo® TQ-S上的ACQUITY UPLC® I-Class系統(tǒng)可使樣品殘留量減少至0.0005%以下，且其線性定量范圍跨度可達(dá)四個數(shù)量級以上。
三、解決方案
Xevo TQ-S是具有高靈敏度的用于LC/MS/MS分析的質(zhì)譜儀。它需要一個能夠解決交叉污染問題的UPLC® 入口，以與該儀器寬泛的線性動態(tài)范圍相匹配。ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)可選用兩種樣品管理器：固定定量環(huán)(SM-FL)或流通針式(SM-FTN)進(jìn)樣器，這兩者在設(shè)計上均能實現(xiàn)良好的抗交叉污染性能。在分析奧美拉唑時，采用SM-FTN設(shè)計。該種類型的進(jìn)樣器，在分析過程中，以移動相(梯度)沖洗針頭內(nèi)部。在進(jìn)樣口，F(xiàn)TN采用單種溶劑清洗針頭外部，且在設(shè)計上能夠?qū)崿F(xiàn)防止清洗溶液與樣品或流動相接觸。在密封面同時清洗針頭以及密封墊可減少污染幾率。清洗程序已編入本方法中，且可設(shè)置為在進(jìn)樣之前以及進(jìn)樣之后清洗。清洗溶劑的組成取決于樣品，且其必須能夠很容易地溶解分析物。對于pKa為8.8的奧美拉唑來說，可采用含有氫氧化銨的清洗溶劑來清洗注射器。此外，當(dāng)將氫氧化銨用于流動相時，系統(tǒng)的交叉污染將更低。在堿性條件下，可使奧美拉唑的離子化效率進(jìn)一步提高。為評估交叉污染，向色譜柱注射具最高濃度(10 ng/mL或10 pg)的標(biāo)準(zhǔn)品。如圖1所示，在注射最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品之后首次進(jìn)行空白注射時，未觀察到有交叉污染。
基于校準(zhǔn)曲線，確定樣品殘留量低于0.0005%，而這低于質(zhì)譜的檢測下限。如圖2所示，在500 ag至10 pg范圍內(nèi)，采用1/x權(quán)重系數(shù)，可獲得相關(guān)系數(shù)為0.99997的線性，這足以證實可在與Xevo TQ-S連用的ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)上對奧美拉唑進(jìn)行線性校準(zhǔn)。
四、小結(jié)
ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)非常適用于需要跨四個以上數(shù)量級進(jìn)行定量的高靈敏度LC/MS/MS方法的交叉污染要求。在對奧美拉唑進(jìn)行分析時，在Xevo TQ-S上未檢測到樣品殘留，且由此可知，樣品殘留量已減少至0.0005%以下。由于樣品殘留量很少，可在500 fg/mL至10 ng/mL或500 ag至10 pg之間進(jìn)行校準(zhǔn)。
