水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測的固相萃取方法（Copure®ALN）
一、實驗?zāi)康?br />本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測水產(chǎn)品中孔雀石綠含量。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗?zāi)繕宋?br />孔雀石綠(CAS:569-64-2) 。
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于鮮活水產(chǎn)品中孔雀石綠的檢測的HPLC檢測及確證。
四、參考標準
《GB/T 19857-2005水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測定》。
五、實驗材料
Biocomma®Copure® 中性氧化鋁固相萃取柱1000mg/3mL(Cat. No. COALN31000)。
六、實驗步驟
1、樣品提取
準確稱取魚肉樣品5.0 g于50 mL離心管中，加入10 mL 乙腈，超聲波振蕩提取5 min，渦旋1 min，4000r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中,殘渣按照上述步驟重復(fù)提取一次；合并兩次提取液，用乙腈定容至25 mL。
2、SPE柱凈化
(1) 活化：中性氧化鋁固相萃取柱使用前用5 mL乙腈活化。
(2) 上樣和洗脫：在中性氧化鋁固相萃取柱上加入5 mL待凈化樣品，收集流出液，然后用4 mL乙腈洗脫，合并收集流出液。
(3) 重新溶解：流出液45 ℃氮吹至近干，1 mL乙腈定容，過0.45 μm濾膜，待上機測試。
3、HPLC條件
設(shè) 備：Waters Alliance 2690
色譜柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm，5μm)
檢測器 ：Waters 2487 紫外檢測器
流動相：A：乙腈 B：0.05 mol/L乙酸銨緩沖溶液
洗脫方式：梯度洗脫
表1 梯度洗脫條件
流速：1.2 mL/min
檢測波長：618 nm
進樣體積: 50 μL
七、實驗結(jié)果
1、0.5 mg/kg魚肉中孔雀石綠的添加回收結(jié)果
表2 0.5 mg/kg魚肉中孔雀石綠的添加回收結(jié)果
2、添加水平為0.5 mg/kg魚肉中孔雀石綠檢測的液相色譜圖
圖1 添加水平為0.5 mg/kg魚肉中孔雀石綠檢測的液相色譜圖
