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公司基本資料信息
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使用方法:
該法從細(xì)菌中提取RNA——用勻漿器將組織磨碎,加入TRIzol處理組織。5分鐘后加入氯仿,以每分鐘12000轉(zhuǎn)離心5分鐘,樣品即分成水樣層、中間層和層。
※RNA存在于水樣層中,收集水樣層后可以通過異丙醇沉淀RNA來還原。
※在除去水樣層后,層中的DNA和蛋白質(zhì)也能相繼以沉淀的方式還原:乙醇能使中間層的DNA沉淀析出,在層中加入異丙醇能沉淀出蛋白質(zhì)。
每100ml TRIzol可以抽提100個(gè)六孔板中的樣品或100個(gè)50-80mg的組織樣品。無論樣品是人、動(dòng)物、植物還是細(xì)菌組織,該方法對(duì)少量的組織 (50-100mg)和細(xì)胞(約五百萬個(gè))及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(超過一千萬個(gè))均有較好的分離效果。
每一百萬細(xì)胞用TRIzol抽提可得5-15微克RNA,每毫克組織用TRIzol抽提可得1-10微克RNA(產(chǎn)量因細(xì)胞和組織不同而異)。
TRIzol操作上的簡便性允許其同時(shí)處理多個(gè)樣品,所有的操作可以在一小時(shí)內(nèi)完成。
TRIzol抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白質(zhì)的污染,故而能夠作RNA 印跡分析、斑點(diǎn)雜交、poly(A)+ 選擇、體外翻譯、RNA酶保護(hù)分析和單分子克?。≒CR)。
※如果是用于PCR,當(dāng)兩條引物位于單一外顯子內(nèi)時(shí),建議用級(jí)聯(lián)擴(kuò)大的DNase I(Cat. No. 18068)來處理抽提的總RNA。
※TRIzol試劑能促進(jìn)不同種屬、不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于 7kb和15kb之間的不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體RNA條帶位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間 (tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí),其A260/A280比值≥1.8。抽提小RNA時(shí)宜-70℃沉淀過夜。
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