一、原理本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的蘇丹紅和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭蘇丹紅抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物蘇丹紅的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較可得出相應(yīng)蘇丹紅的含量。二、試劑盒技術(shù)指標(biāo)試劑盒靈敏度： 0.4ppb樣本定量檢測下限水基質(zhì)（番茄醬、壇壇鄉(xiāng)） 0.4ppb油基質(zhì)（辣椒油，辣椒醬） 0.4ppb粉末狀（辣椒粉） 1.0ppb交叉反應(yīng)率蘇丹1號 ………………………………………………
蘇丹2號 ……………………………………………… ＜1%
蘇丹4號 ……………………………………………… ＜1%
對位紅 ………………………………………………… 120%樣本回收率水基質(zhì) ……………………………………………… 75±10%油基質(zhì) ……………………………………………… 50±10%粉末狀 ……………………………………………… 65±10%三、 試劑盒組成1、微量測試孔：96T2、 標(biāo)準(zhǔn)品液：（1ml/瓶） 0ppb、0.4ppb、3.2ppb、6.4ppb、12.8ppb、25.6ppb3、 酶標(biāo)記物 12ml4、 抗體工作液 7ml5、 底物緩沖液破 7ml6、 底物液 7ml7、 終止液 7ml8、 20倍濃縮洗滌液 50ml9、1mg/ml標(biāo)準(zhǔn)品液：（0.2ml）四、樣本處理取1g樣品（辣椒面、辣椒油、辣椒醬、番茄醬），加入3 mL丙酮溶液，超聲震蕩20 min，渦旋混合0.5 min，靜置10 min， 3000 r/min離心分離10 min，取上清100 μL用PBST稀釋10倍至1 mL，取50 μL進(jìn)行ELISA測定。五、操作步驟1. 將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～26℃）下平衡30min以上，將需用的條板固定于支架，按順序編號；2. 洗液配制：將50 mL濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水稀釋至1000 mL備用。（或按需量稀釋）3. 標(biāo)準(zhǔn)品的配制：先將試劑盒中的1 mg/mL蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)品用洗液稀釋1000倍，變成1000 ng/mL，再用洗液將1000 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品分別稀釋成0.4 ng/mL， 3.2 ng/mL，6.4 ng/mL，12.8 ng/mL，25.6 ng/mL。（現(xiàn)配現(xiàn)用）4. 在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入50 μL標(biāo)準(zhǔn)品，樣品孔加入50 μL待測樣品，然后每孔加入50 μL抗體（加入標(biāo)品和樣品時(shí)無時(shí)間差的影響），輕拍混勻，37℃下孵育30min；5. 倒出孔中的液體，以試劑盒濃縮洗液稀釋20倍后作為洗液，用洗板機(jī)洗滌4～6遍；沒有洗板機(jī)的用戶可用300 μL洗液充入各孔中，靜置20 s，倒出孔中的液體，將微孔架倒置，在吸水紙上連續(xù)拍打3次以上，以保證完全除去孔中的液體，重復(fù)操作4～6遍；6. 每孔加入酶標(biāo)記物100 μL，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃ 環(huán)境中反應(yīng)20 min ，取出重復(fù)洗板步驟。7. 顯色：每孔加入底物緩沖液50 μL，再加底物液50 μL．輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后，置37℃ 環(huán)境中反應(yīng)10 min。8. 測定：每孔加入終止液50 μL，輕輕振蕩混勻．設(shè)定酶標(biāo)儀于450 nm處（建議用雙波長450/630 nm 檢測，在20 min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD 值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。標(biāo)準(zhǔn)樣品配制方法：（1）準(zhǔn)備5個(gè)1 mL瓶子，其中一個(gè)加入1000 μL洗液，一個(gè)加入700 μL洗液，其余的分別加入500 μL洗液。（2）在1000 μL洗液瓶子中先吸出25.6 μL的洗液，然后加入25.6 μL的1000 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品，混勻，使其濃度為25.6 ng/mL，作好記號；（3）再從25.6 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一個(gè)500 μL洗液的瓶子中，使其濃度為12.8 ng/mL，混勻，作好記號；（4）再從12.8 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一個(gè)500 μL洗液的瓶子中，使其濃度為6.4 ng/mL，混勻，作好記號；（5）再從6.4 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一個(gè)500 μL洗液的瓶子中，使其濃度為3.2 ng/mL，混勻，作好記號；（6）再從3.2 ng/mL的瓶子中吸出100 μL加入其中一個(gè)700 μL洗液的瓶子中，使其濃度為0.4 ng/mL，混勻，作好記號。 （加樣前應(yīng)將標(biāo)準(zhǔn)品充分混勻，配好后在半小時(shí)內(nèi)使用）七、 結(jié)果判定以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中蘇丹紅實(shí)際濃度。八、 注意事項(xiàng)1．室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20-25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。2．洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。3．混合要均勻，洗板要徹底，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。4．反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。5．將不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封; 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。6．不要使用過了有效日期的試劑盒，不要使用不同批號試劑盒中的試劑。7．顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之，0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.6時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。8．該試劑盒反應(yīng)溫度為25 ℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。九、儲藏條件和保質(zhì)期儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒。
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