一、 測(cè)量原理
分光光度法測(cè)量的理論依據(jù)是伯郎—比耳定律：當(dāng)容液中的物質(zhì)在光的照射和激發(fā)下，產(chǎn)生了對(duì)光吸收的效應(yīng)。但物質(zhì)對(duì)光的吸收是有選擇性的，各種不同的物質(zhì)都有其各自的吸收光譜。所以根據(jù)定律當(dāng)一束單色光通過(guò)一定濃度范圍的稀有色溶液時(shí)，溶液對(duì)光的吸收程度A與溶液的濃度c（g/l）或液層厚度b(cm)成正比。其定律表達(dá)式A=abc
（a是比例系數(shù)）。當(dāng)c的單位為mol/l時(shí)，比例系數(shù)用ε表示，則A=εbc稱為摩爾吸光系數(shù)。其單位為L(zhǎng)•mol-1•cm-1它是有色物質(zhì)在一定波長(zhǎng)下的特征常數(shù)。
T(透光率)=I/I0 A(吸光度)= -lgT 或 A=K•C•L(比色皿的厚度)
測(cè)定時(shí)，入射光I,
吸光系數(shù)和溶液的光徑長(zhǎng)度不變時(shí)，透過(guò)光是根據(jù)溶液的濃度而變化的，即“K”為常數(shù)。比色皿厚度一定，“L”、“I0”也一定。只要測(cè)出A即可算出“C”。
二、 722型分光光度計(jì)的使用
1、將靈敏度旋鈕調(diào)至“1”檔（信號(hào)放大倍率最?。?。
2、開(kāi)啟電源，指示燈亮 ，選擇開(kāi)關(guān)置于“T”，波長(zhǎng)調(diào)至到測(cè)試用波長(zhǎng)。儀器預(yù)熱20分鐘。
3、打開(kāi)試樣室（光門自動(dòng)關(guān)閉），調(diào)節(jié)透光率零點(diǎn)旋鈕，使數(shù)字顯示為000.0。（調(diào)節(jié)100%T旋鈕），蓋上試樣室蓋，將比色皿
架處于蒸餾水校正位置，使光電管受光，調(diào)節(jié)透光率100%旋鈕使數(shù)字顯示100.0。如顯示不到100.0，則可適當(dāng)增加微電流放大的倍數(shù)。（增加靈敏度
的檔數(shù)同時(shí)應(yīng)重復(fù)（3）調(diào)節(jié)儀器透光率的“0”位）但盡量使倍率置于低檔使用。這樣儀器會(huì)有更高的穩(wěn)定性。
4、預(yù)熱后，按（3）連續(xù)幾次調(diào)整透光率的“0”位和“100%”的位置，待穩(wěn)定后儀器可進(jìn)行測(cè)定工作。
三、 吸光度“A”的測(cè)量
將選擇開(kāi)關(guān)置于A 。調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕，使得數(shù)字顯示為零，然后將被測(cè)樣品移入光路，顯示值即為被測(cè)樣品的吸光度值。
四、 濃度c的測(cè)量
將選擇開(kāi)關(guān)由“A”旋至“C”將已標(biāo)定濃度的樣品放入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測(cè)樣品放入光路即可讀出被測(cè)樣品的濃度值。
注意事項(xiàng)：
1、測(cè)量完畢，速將暗盒蓋打開(kāi)，關(guān)閉電源開(kāi)關(guān)，將靈敏度旋鈕調(diào)至最低檔，取出比色皿，將裝有硅膠的干燥劑袋放入暗盒內(nèi)，關(guān)上蓋子，將比色皿中的溶液倒入燒杯中，用蒸餾水洗凈后放回比色皿盒內(nèi)。
2、每臺(tái)儀器所配套的比色皿不可與其它儀器上的表面皿單個(gè)調(diào)換。
使用方法
（1）預(yù)熱儀器 將選擇開(kāi)關(guān)置于“T”，打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，使儀器預(yù)熱20分鐘。為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照，預(yù)熱儀器時(shí)和不測(cè)定時(shí)應(yīng)將試樣室蓋打開(kāi)，使光路切斷。
（2）選定波長(zhǎng) 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)手輪，調(diào)至所需要的單色波長(zhǎng)。
（3）固定靈敏度檔 在能使空白溶液很好地調(diào)到“100%”的情況下，盡可能采用靈敏度較低的擋，使用時(shí)，首先調(diào)到“1”擋，靈敏度不夠時(shí)再逐漸升高。但換擋改變靈敏度后，須重新校正“0%”和“100%”。選好的靈敏度，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不要再變動(dòng)。
（4）調(diào)節(jié)T=0% 輕輕旋動(dòng)“0%”旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”，（此時(shí)試樣室是打開(kāi)的）。
（5）調(diào)節(jié)T=100% 將盛蒸餾水（或空白溶液，或純?nèi)軇┑谋壬蠓湃氡壬笞苤械牡谝桓駜?nèi)，并對(duì)準(zhǔn)光路，把試樣室蓋子輕輕蓋上，調(diào)節(jié)透過(guò)率“100%”旋鈕，使數(shù)字顯示正好為“100.0”。
（6）吸光度的測(cè)定 將選擇開(kāi)關(guān)置于“A”，蓋上試樣室蓋子，將空白液置于光路中，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)節(jié)旋鈕，使數(shù)字顯示為“.000”。將盛有待測(cè)溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格內(nèi)，蓋上試樣室蓋，輕輕拉動(dòng)試樣架拉手，使待測(cè)溶液進(jìn)入光路，此時(shí)數(shù)字顯示值即為該待測(cè)溶液的吸光度值。讀數(shù)后，打開(kāi)試樣室蓋，切斷光路。
重復(fù)上述測(cè)定操作1-2次，讀取相應(yīng)的吸光度值，取平均值。
（7）濃度的測(cè)定 選擇開(kāi)關(guān)由“A”旋置“C”，將已標(biāo)定濃度的樣品放入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測(cè)樣品放入光路，此時(shí)數(shù)字顯示值即為該待測(cè)溶液的濃度值。
（8）關(guān)機(jī) 實(shí)驗(yàn)完畢，切斷電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架用軟紙擦凈。
