可用于ELISA實(shí)驗(yàn)樣本有血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、尿液、唾液、腦脊液等。不同的樣本類型有不同的處理方法。
1、血清:
指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。
血清是 ELISA 實(shí)驗(yàn)常用的樣本，其預(yù)處理也十分簡單。
使用無熱原無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液樣本，將試管或離心管在室溫下放置 2 小時或 4℃過夜，分離出血清（建議傾斜試管或離心管以擴(kuò)大液面的橫截面，使血清可以更大程度地分離出來）。4℃下以1000×g 離心 20 分鐘，小心收集上清液（血清），立即進(jìn)行測定。建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存，避免反復(fù)凍融。
在收集血液樣本的過程中應(yīng)避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，這種情況下，ELISA 實(shí)驗(yàn)中將會出現(xiàn)非特異性顯色反應(yīng)，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。另外，樣本還應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榧?xì)菌可能含有內(nèi)源性HRP，也會導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。
2. 血漿:
是離開血管的全血經(jīng)抗凝處理后，通過離心沉淀，所獲得的不含細(xì)胞成分的液體。血漿與血清的主要區(qū)別在于血漿中含有纖維蛋白。
使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本，采集后 30 分鐘內(nèi)，4℃下以 1000×g離心 15 分鐘，小心收集上清液（血漿）。建議在-20℃或-80℃下將收集的血漿分裝保存，避免反復(fù)凍融。樣本應(yīng)避免溶血或高血脂。常見的抗凝劑包括 EDTA(部分酶相關(guān)指標(biāo)不建議使用）、肝素鈉、枸櫞酸鈉等。檢測前請仔細(xì)閱讀 ELISA 試劑盒說明書，查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求。
