PCR中文翻譯為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。自1985年P(guān)CR技術(shù)發(fā)明以來(lái)，技術(shù)發(fā)展已非常成熟了，PCR儀主要可以劃分為三類(lèi)，即：常規(guī)PCR儀、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、數(shù)字PCR儀。
我們今天主要講實(shí)時(shí)熒光PCR儀。
PCR技術(shù)在近30年的不斷發(fā)展創(chuàng)新中,最受矚目的當(dāng)屬熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)(real-time quantitative PCR,或qPCR)。
定量PCR技術(shù)真正實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,通過(guò)對(duì)PCR過(guò)程的實(shí)時(shí)監(jiān)控,專(zhuān)一、靈敏快速、可重復(fù)地精確定量起始模板濃度,已經(jīng)在科研和臨床診斷領(lǐng)域得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。
PCR的工作原理是變性、退火、延伸三個(gè)步驟。
而對(duì)于實(shí)時(shí)熒光PCR儀的工作原理展開(kāi)來(lái)講就是：將標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后，完成高溫變性、低溫復(fù)性、適溫延伸的熱循環(huán)，并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律，與模板DNA互補(bǔ)配對(duì)的Taqman探針被切斷，熒光素游離于反應(yīng)體系中，在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光；隨著循環(huán)次數(shù)的增加，被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長(zhǎng)，通過(guò)實(shí)時(shí)檢測(cè)與之對(duì)應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號(hào)強(qiáng)度，求得Ct值（也就是，循環(huán)閾值，即：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)），同時(shí)利用數(shù)個(gè)已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，即可得出待測(cè)標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù)。
這么講可能你還不能完全理解，那你可以這么去理解，一個(gè)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，最關(guān)鍵的是兩大系統(tǒng)，一個(gè)光電系統(tǒng)，一個(gè)溫控系統(tǒng)。光電系統(tǒng)是用來(lái)進(jìn)行光電信號(hào)收集和轉(zhuǎn)換的，溫控系統(tǒng)是用來(lái)維持核酸擴(kuò)增所需對(duì)應(yīng)溫度條件的。最后電腦自帶軟件系統(tǒng)會(huì)通過(guò)相關(guān)關(guān)系方程式換算出臨床定量結(jié)果。
關(guān)于實(shí)時(shí)熒光PCR儀的廠(chǎng)家主要如下：
進(jìn)口廠(chǎng)家有羅氏診斷、美國(guó)伯樂(lè)、美國(guó)ABI（ABI已經(jīng)被賽默飛收購(gòu)）。
國(guó)產(chǎn)老牌廠(chǎng)家主要是：上海宏石、杭州博日、西安天隆。
