液相使用常見問題15問答疑！

關(guān)于漂移問題

①溫度控制不好,解決方法是采用恒溫裝置,保持柱溫恒定

②流動(dòng)相發(fā)生変化,解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等

③柱子未平衡好,需對柱子進(jìn)行更長時(shí)間的平衡

關(guān)于快速變化問題

①流速發(fā)生變化,解決辦法是重新設(shè)定流速,使之保持穩(wěn)定

②泵中有氣泡,可通過排氣等操作將氣泡趕出

③流動(dòng)相不合適,解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合

原因

①柱溫波動(dòng)。(即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線波動(dòng)。通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器)

②流動(dòng)相不均勻。(流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移)

③流通池被污染或有氣體

④檢測器出口阻塞。(高壓造成流通池窗口破裂,產(chǎn)生噪音基線)

⑤流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化

⑥柱平衡慢,特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)

⑦流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成

⑧樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K值)以頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線

⑨使用循環(huán)溶劑,不提倡。未調(diào)整檢測器

⑩檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處

①控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器

②使用HPLC級(jí)的溶劑,高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣,使用中使用在線脫氣或氦氣脫氣

③用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑中洗流通池。如有需要,可以用1N的的酸(不要用鹽酸）

④取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗

⑤更改配比或流速。為避兔這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速

⑥用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗。更改流動(dòng)相時(shí),在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對柱子進(jìn)行沖洗。使用離子對試劑、緩沖鹽更應(yīng)注意平衡柱

⑦檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑

⑧改變分析條件。使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子

⑨重新設(shè)定基線。使用新的流動(dòng)相

⑩將波長調(diào)整至最大吸收波長處。重選檢測波長

①樣品量不足,解決方法為増加樣品量

②樣品未從柱子中流出?？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子

③樣品與檢測器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢器

④檢測器衰減太多。調(diào)整衰減即可

⑤檢測器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)

⑥檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗

⑦檢池中有氣泡。解決辦法為排氣

①建議檢測前樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過濾

②建議每天做完樣品后及時(shí)進(jìn)行清洗

③常規(guī)檢測：測試完后直接把色譜柱反向連接采用90%有機(jī)相沖洗45min，最后保存在純甲醇或純乙腈中

④使用緩沖鹽條件：

a.等度條件：使用緩沖鹽之前和之后都用過渡流動(dòng)相以1ml/min流速?zèng)_洗45min

b.梯度條件：使用緩沖鹽之前與初始流動(dòng)相組成相同的過渡流動(dòng)相以1ml/min流速?zèng)_洗45min

注意：過渡流動(dòng)相是指有機(jī)相和水相比例與分析流動(dòng)相相同比例，只是不含有緩沖鹽

c.緩沖鹽沖洗干凈后，采用90%有機(jī)相反向沖洗60min，最后保存在純有機(jī)溶劑中

注意：如果使用緩沖液不能存留色譜柱中過夜

原因

①在流動(dòng)相、檢測器或泵中有空氣(尖銳峰)

②漏液

③流動(dòng)相混合不完全

④溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱)

⑤在同一條線上有其他電子設(shè)備(偶然噪聲）

⑥泵振動(dòng)

解決方法

①流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣

②檢查管路接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換泵密封

③用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑

④減少差異或加上熱交換器

⑤斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正。采用精密級(jí)穩(wěn)壓電源

⑥在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器

原因

①漏液

②流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成

③流動(dòng)相各溶劑不相溶

④檢測器/記錄儀電子元件的問題

⑤系統(tǒng)內(nèi)有氣泡

⑥檢測器內(nèi)有氣泡

⑦流通池污染(即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音

⑧檢測器燈能量不足

⑨色譜柱填料流失或阻塞

⑩流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常

解決方法

①檢查接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封。檢查流通池是否漏液

②檢査流動(dòng)相的組成

③選擇互溶的流動(dòng)相

④斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正

⑤用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)

⑥清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器

⑦用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池

⑧更換燈

⑨更換色譜柱

維修或更換混合器,在流動(dòng)相不走梯度時(shí),建議不使用泵的混合裝置

答：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨)，之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1％

①篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子
②存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子
③可能柱超載，減少進(jìn)樣量

①樣品量不足，解決辦法為增加樣品量
②樣品未從柱子中流出，可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子
③樣品與檢測器不匹配，根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器
④檢測器衰減太多，調(diào)整衰減即可
⑤檢測器時(shí)間常數(shù)太大，解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)
⑥檢測器池窗污染，解決辦法為清洗池窗
⑦檢測池中有氣泡，解決辦法為排氣
⑧記錄儀測壓范圍不當(dāng)，調(diào)整電壓范圍即可
⑨流動(dòng)相流量不合適，調(diào)整流速即可
⑩檢測器與記錄儀超出校正曲線，解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線

①泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對溶劑進(jìn)行脫氣處理
②比例閥失效，更換比例閥即可
③泵密封墊損壞，更換密封墊即可
④溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法
⑤系統(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可
⑥梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的

柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因：
①拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查
②把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查
③將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查。只用于使用過的柱子
④更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過濾器便可避免柱壓過高的問題