在HPLC分析中，在色譜柱正常，樣品濃度適宜，分析方法合適，色譜峰在出峰時(shí)間較短的條件下，峰型應(yīng)對(duì)稱而尖銳。但在實(shí)際操作中，如果對(duì)樣品不了解，前處理不恰當(dāng)或者分析方法不合理等，會(huì)出現(xiàn)峰形不正常的情況，其中雙峰現(xiàn)象就是液相色譜中常見的問題之一。
色譜柱
如果在樣品分析時(shí)發(fā)現(xiàn)每個(gè)色譜峰都有雙峰出現(xiàn)，尤其在采用單一純物質(zhì)時(shí)，則可以確定是色譜柱出現(xiàn)問題了，一般是柱頭受損或者柱頭固定相污染引起的。
溶劑問題
目前HPLC分析多為反相色譜，流動(dòng)相多為甲醇、乙腈、水，加各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動(dòng)相相溶的溶劑溶解，最佳的溶解方法是用流動(dòng)相溶解。在實(shí)際分析中，有時(shí)候?yàn)榱藰悠返娜芙庑曰蚍€(wěn)定性加入了一點(diǎn)的緩沖液，緩沖液的酸堿性可能會(huì)導(dǎo)致樣品轉(zhuǎn)化，從而產(chǎn)生雙峰現(xiàn)象。此時(shí)需要更換緩沖液，調(diào)整溶劑pH值，或者用流動(dòng)相配置樣品。
進(jìn)樣量
當(dāng)用溶劑極性強(qiáng)度大的試劑，如純甲醇、純乙腈，純乙醇，而分析體系中以水為主時(shí)，如果樣品進(jìn)樣量大，如定量管為20ul，此時(shí)單一的純物質(zhì)會(huì)出現(xiàn)雙峰，第二峰比第一峰小(每次都不太一樣)，且拖尾，保留時(shí)間會(huì)提前(相對(duì)進(jìn)樣量少而言)，將進(jìn)樣量減少一半以上，峰型將變?yōu)檎?。這是樣品的溶劑與流動(dòng)相極性相差太大，而流動(dòng)相來(lái)不及將其稀釋達(dá)到平衡造成的，此情況下需要減少進(jìn)樣量。
樣品特性
有些樣品由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，存在互變異構(gòu)現(xiàn)象，而這種互變異構(gòu)體無(wú)法分開，而是以一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡存在。在色譜分析時(shí)，在一個(gè)特定的條件下(如pH值、流動(dòng)相極性、溫度等)，一種物質(zhì)將出現(xiàn)雙峰，雙峰靠的很近，基本齊高，不拖尾，條件稍一變化，尤其pH，雙峰現(xiàn)象將消失，如紅霉素等。
pH值
體系pH值對(duì)色譜雙峰的影響出現(xiàn)在各個(gè)環(huán)節(jié)上(前面已經(jīng)提到)，尤其在緩沖液流動(dòng)相平衡過(guò)程中其影響更為明顯。當(dāng)連續(xù)進(jìn)樣時(shí)，受pH的連續(xù)變化影響會(huì)經(jīng)常遇到這種雙峰的情況。另外，在樣品分析時(shí)，流動(dòng)相的pH盡量遠(yuǎn)離被分析物的等電點(diǎn)，否則也容易引起雙峰的產(chǎn)生。在用離子對(duì)試劑分析時(shí)，選擇不好條件也會(huì)容易引起雙峰的產(chǎn)生。
HPLC分析中，在色譜柱正常，樣品靈敏度足夠，分析方法合適，色譜峰在出峰時(shí)間較短的條件下（不包括梯度），峰型應(yīng)對(duì)稱而尖銳。但是，在對(duì)樣品了解程度不夠，方法不妥，樣品處理方法及進(jìn)樣方式不合理下，會(huì)出現(xiàn)各種意想不到的問題，而對(duì)色譜峰難以作出合理的解釋，尤其對(duì)于新手更是如此，所以，了解每種鬼峰出現(xiàn)的原因?qū)ξ覀兊姆治龉ぷ魇欠浅Ｖ匾摹?/p>
文章內(nèi)容來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)，轉(zhuǎn)載僅為分享知識(shí)，如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系刪除。
