一、紫外可見分光光度計的誕生
世界首臺紫外可見分光光度計誕生于1918年的美國國家標準局。后來紫外可見分光光度計經(jīng)不斷改進，又出現(xiàn)自動記錄、自動打印、數(shù)字顯示、微機控制等各種類型的儀器，使光度法的靈敏度和準確度也不斷提高，其應(yīng)用范圍也在不斷擴大。紫外可見分光光度法從問世以來，在應(yīng)用方面有了很大的發(fā)展，尤其是在相關(guān)學科發(fā)展的基礎(chǔ)上，促使分光光度計儀器的不斷創(chuàng)新，功能更加齊全，使得光度法的應(yīng)用更拓寬了范圍。
二、紫外可見分光光度計的工作原理
1 紫外可見分光光度計基本工作原理和紅外光譜儀相似，利用一定頻率的紫外可見光照射被分析的有機物質(zhì)，引起分子中價電子的躍遷，它將有選擇地被吸收。一組吸收隨波長而變化的光譜，反映了試樣的特征。
2 紫外可見光的范圍內(nèi)，對于一個特定的波長，吸收的程度正比于試樣中該成分的濃度，因此測量光譜可以進行定性分析，而且根據(jù)吸收與已知濃度的標樣的比較，還能進行定量分析。
三、首次使用紫外可見分光光度計人員須知
1 首次使用紫外可見分光光度計的人員，一般來說，一定要詳細閱讀儀器安全操作手冊，否則嚴禁操作儀器。準備操作儀器前，需要先查看一下指針儀器在斷電的情況下，表面指針是否指向零刻度。如若不是，理應(yīng)先調(diào)零然后才能連接電源。在使用的過程中，操作員應(yīng)該盡量避免對鏡燈的觸碰，放大器使用過后，一定需要把檔位歸置到零。
2 除此之外，在操作紫外可見分光光度計時，操作人員需要留意一下機器的干燥劑，因為這是非常重要的。通常情況下，干燥劑有效時，儀器的工作是不會出現(xiàn)任何問題的?？墒钱敻稍飫┦е?，所出現(xiàn)的問題是非常嚴重的。除了儀器上面顯數(shù)不準之外，很容易使反射鏡變得污穢，從而使得光線率不準確。因此，日常使用儀器時，一定要注意干燥是否有效。當發(fā)現(xiàn)失效后，要及時進行更換。
四、分光光度計使用注意事項
1 紫外可見分光光度計在開機前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出，儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。
2 筆試PH計測定時，禁止將試劑或液體物質(zhì)放在儀器的表面上，如有溶液溢出或其它原因?qū)悠凡叟K，要盡可能及時清理干凈。
3 比色皿內(nèi)溶液以皿高的2/3～4/5為宜，不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測定時應(yīng)保持比色皿清潔，池壁上液滴應(yīng)用擦鏡紙擦干，切勿用手捏透光面。測定紫外波長時，需選用石英比色皿。
4 實驗結(jié)束后將比色皿中的溶液倒盡，然后用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈，倒立晾干。關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi)，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理老師認可方可離開。
五、紫外可見分光光度計出現(xiàn)問題處理方法
1 儀器電源接通后，光源不亮。
原因：
①光源燈泡已損壞。
②保險管燒壞。
處理方法：
①更換氘燈或鎢燈。
②更換保險管。
2 紫外可見分光光度計噪音較大。
原因：
光源燈泡使用時間超過壽命期。
處理方法：
更換光源燈泡。
3 自檢時提示波長自檢出錯。
原因：
自檢過程中可能打開過儀器樣品室的蓋子。
處理方法：
關(guān)上儀器樣品室蓋子，重新自檢。
4 儀器自檢時提示通訊錯誤。
原因：
儀器與電腦之間的數(shù)據(jù)線沒有連接好。
處理方法：
連接好數(shù)據(jù)線，重新打開儀器和軟件，重新自檢。
5 儀器零點飄忽不定，主要反映在簡易儀器上。
原因：
在簡易儀器中，零點往往是通過電位器來調(diào)整，這種電位器一般是炭膜電阻制作的，使用久了往往造成接觸不良。
處理方法：
更換電位器。
6 在使用過程中，出現(xiàn)數(shù)字顯示不能歸零，同時伴有圖線記錄基線位置偏高。
原因：
①光電倍增等老化，性能降低。
②信號處理板可能發(fā)生故障。
③前置放大版出現(xiàn)故障，引起反饋量增大
處理方法：
①開機通電，先做記錄故障曲線，再與原始記錄的標準曲線對照，找出異同點，并作一下定性定能分析。然后用一只同型號規(guī)格的新光電倍增管替換機上的光電管，再開機實驗，結(jié)果記錄出來的圖線并沒有什么變化，由此證明光電倍增管沒有老化變質(zhì)。
②進一步檢查信號處理板，未發(fā)現(xiàn)信號處理板各元器件損壞，對影響靈敏度有關(guān)的電位器檢測，結(jié)果測得數(shù)據(jù)正常，這說明信號處理板沒有故障。
7 測試過程中提示能量太低。
原因：
①光源燈泡使用時間超過壽命期。
②樣池中有不透光的東西擋住了光。
處理方法：
①更換光源燈。
②拿走擋光的物品。
8 吸光值結(jié)果出現(xiàn)負值（最常見）。
原因：
沒做空白記憶、樣品的吸光值小于空白參比液。
處理方法：
做空白記憶、調(diào)換參比液或用參比液配置樣品溶液。
9 當儀器波長固定在某個波長下時，吸光值信號上下擺動，特別是測量模式轉(zhuǎn)換為按鍵開關(guān)式的簡易儀器。
原因：
開關(guān)觸點因長期氧化所致造成接觸不良。
處理方法：
用金屬活化劑清洗按鍵觸點即可。
10 樣品信號重現(xiàn)性不良
原因：
排除儀器本身的原因外，最大的可能是樣品溶液不均勻所致，在簡易的單光束儀器中，樣品池架一般為推拉式的，有時重復推拉不在同一個位置上。
處理方法：
①采取正確的試樣配置手段。
②修理推拉式樣品架的定位碰珠。
