如何校準生化分析儀

   2013-04-12 來寶網(wǎng)776
核心提示:一個實驗室測定結(jié)果的可靠性是由其精密度、準確性及可比性所決定的,一般必需從下面幾方面著手。一. 選好測定方法;二. 購買質(zhì)
 一個實驗室測定結(jié)果的可靠性是由其精密度、準確性及可比性所決定的,一般必需從下面幾方面著手。

一. 選好測定方法;
二. 購買質(zhì)量過硬的試劑盒;
三. 要有質(zhì)優(yōu)的測試儀器;
四. 必需進行正確的校準;
五. 還要規(guī)范化操作;
六. 搞好過硬的室內(nèi)質(zhì)量控制;
七. 積極參加室間質(zhì)評活動;
八. 還要有一支素質(zhì)高的隊伍。
    現(xiàn)就生化分析儀的校準問題提出個人看法。
一、 校準的重要性和必要性
    首先必須明確生化分析儀不論如何先進,它還是一個比較器,它測試出來的標本結(jié)果是隨著標準限的設置不同而變化的。所以,在衛(wèi)生部臨床檢驗中心擬定的“臨床實驗室(定量測定)室內(nèi)質(zhì)控工作指南”中明確指出“對測定標本的儀器一定要求進行校準,校準時要選擇合適的(配套的)標準品/校準品;如有可能,校準品應能溯源到參考方法或/和參考物質(zhì);對不同的分析項目要根據(jù)其特性確立各自的校準頻率。”這說明校準儀器是室內(nèi)質(zhì)控的重要部分,強調(diào)了校準工作的必要性和重要性,同時指出了校準的方法和要求。
二、 確立測定系統(tǒng)的概念
    對于一個臨床檢測項目,如果所用方法的測定原理、試劑、儀器、校準品中任何一個不同,都可能得到不同的測定結(jié)果。因此,測定系統(tǒng)包括測定原理、試劑、儀器、校準品四要素。如果我們想要得到準確可靠的測定結(jié)果,而該結(jié)果又具有與國際、國內(nèi)其他實驗室的可比性,應該自己建立一個標準測定系統(tǒng)。在全自動生化分析儀上使用配套的試劑和標準品,即日立7170使用寶靈曼的試劑和校準品(c.f.a.s),在貝克曼CX-7生化分析儀上使用貝克曼的試劑和校準品等。各儀器廠家均有自己的標準測定系統(tǒng)。對于校準品不能亂用,如絕對不能用貝克曼的校準品校準日立生化儀,同樣也不能用寶靈曼的校準品去校準貝克曼生化儀。
三、 校準品和質(zhì)控品
    校準品(Calibration materials)含有已知量的欲測物,用以校準該測定方法的數(shù)值,它與該方法及試劑、儀器是相關(guān)聯(lián)的。校準品的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)誤差。因此最好為人血清基質(zhì),以減少基質(zhì)效應造成的誤差。
    質(zhì)控品(Control materials)只用于和待測標本同時測定的,為了控制標本的測定誤差,因此要求保存時間十分穩(wěn)定。前者是校準其值而后者是控制誤差用的。
四、 校準前準備
    1 .了解燈泡已使用多久?檢查飄移是否合乎要求;
    2. 檢查比色杯的清潔及磨損情況?必要時進行更換;
    3. 用清潔劑泡洗管道
    4. 測定儀器的精密度及線性是否達到儀器性能要求?
 
五、 定值質(zhì)控血清是否可以校準儀器?
    我們在相同條件下,同時用五個進口產(chǎn)品,每家兩種不同濃度的定值如TP、ALB、UREA、UA、ALP、GGT、CK、HBDH、LD、AMY等,在日立7170A上進行測定(用常規(guī)試劑),詳見質(zhì)控血清對部份常規(guī)測定項目(如T、ALB、UREA、Cr、UA、K、Na、Cl、AST、ALT)結(jié)果與靶值比較:
表  不同廠家定值質(zhì)控對TP、ALB、、AST、ALP結(jié)果與靶值比較

                    TP ALB UREA AST ALP 
                   T 偏差% T 偏差% T 偏差% T 偏差% T 偏差% 
汽巴康寧1 57 4.39 29 0 5.0 4.5 43 -10.5 96 4.2 
汽巴康寧2 46 4.89 24 2.08 19.3 -5.76 184 -11.7 265 0.2 
寶靈曼1 50 2.0 34.8 -5.17 8.96 0.45 58.3 -11.2- 242 2.7 
寶靈曼2 48.6 2.88 33.7 -5.04 24 -6.77 140 -12.3 384 2.7 
RANDOX1 59.7 6.36 40.8 3.88 7.67 4.3 62 -17.7 214 -16.1 
RANDOX2 39 8.33 26.9 5.98 21.6 -5.67 144 -12.7 394 -17.1 
Human1 72 4.18 46.7 -4.18 3.78 5.16 33.5 -7.5 168 -2.2 
Human2 29.8 -2.68 29.8 -2.76 25.1 -5.08 151 -11.7 287 -9.1 
Bio-Red1 63 0 39 1.28 7.1 0 24 -14.6 25 22 
Bio-Red2 42 1.79 27 0 18.0 -4.44 201 -14.3 298 0.84 
* 從總蛋白結(jié)果來看RANBOX與Bio-Red 相差為6.45%,而寶靈曼與Bio-Red 較為接近;
* 從白蛋白結(jié)果分析,寶靈曼與Bio-Red相對相差5.75%,與總蛋白結(jié)果明顯不同。Bio-Red則與汽巴康寧比較接近。
* UREA結(jié)果中凡是高值均上不去,分析其原因很可能與我們采用試劑盒的質(zhì)量有關(guān),所以試劑盒的線性范圍理應成為選擇試劑盒的重要依據(jù)之一。但從低值結(jié)果分析,也有5%的偏差(Bio-Red與Human)
* AST與ALT測定值均低于靶值,這就涉及我們選用什么K值問題。
* ALP測定中RANDOX(-16.6%)與寶靈曼(2.7%)靶值之間竟相差19.3%,這可能涉及試劑盒選用緩沖液種類,PH值以及所用ε值等有關(guān)。

    通過上述結(jié)果比較,說明不同廠家生產(chǎn)的定值質(zhì)控血清靶值之間有的相差較大,提示我們決不能用定值質(zhì)控血清代替校準品作校準用。
六、 校準方法
    例如日立(Hitachi)系列您必須購買寶靈曼(Boehringer)的試劑及其校準的說明書設置參數(shù),用c.f.a.s.校準血清進行校準,即可獲得各項目的校準K值,同時觀察一下各項目測定時反應進程圖,檢查各項目參數(shù)設置是否在最佳位置,如不在最佳位置應予以重新設置并測定。此時得到的K值即為準確的校準K值,然后測定待測的10至20份新鮮血清三次取其平均值,應該說此結(jié)果是用Hitachi-Boehringer檢測系統(tǒng)所獲的測定值。然后用此血清值校準其它測定系統(tǒng)。
表  日立7170、BM試劑連續(xù)四個月每天進行校正(n=81)K值的變化

           TP ALB ALT AST Crea Urea UA TG Chol Glu Ca CK GGT 
Mean 3017 694 3023 2274 14756 2673 1543 1272 1449 1744 592 3864 2603 
 SD  86 6.69  63 49.7  1448 50.2 16.1 16.9 17.4 18.4 56.8 61.11 67.9 
CV%  2.8  1.0  2.1  1.7  9.8  1.9  1.1  1.4  1.2  1.0 9.6  1.6  6.9

七、 關(guān)于酶活性測定校準問題
    有的主張不進行校準而采用固定K值,有的作者以為應該進行校準。酶活力計算公式如下:
      酶活力(u/l)=△A/min×V×106/(ε×v×1)
      令k=V×106/(ε×v)
      則酶活力(u/l)=△A/min×k
    常用K值有以下幾種:
      a) 理論K值:根據(jù)理論摩爾消光系數(shù)(ε)來計算,如NADH為6.22×103
      b) 實測K值:由于儀器波長的精密及半寬度不同,而應根據(jù)實測ε值來設定K值
      c) 廠家給的K值:廠家生產(chǎn)試劑盒說明書上提供的K值(有的廠家提供6.3×103)
      d) 校準K值:通過校準物直接校準得到的K值
    在日立7170A全自動生化分析儀上,可以得到幾種不同的酶K值,見下表
表 日立7170A全自動生化分析儀上用不同方法得到幾種酶的K值
  
指示物 波長 理論K值 實測K值 校準K值 
ALT NADH 340nm 2444 2642(8.1%) 3026(23.8%) 
AST NADH 340mm 2444 2642(8.1%) 2775(13.5%)
CK NADPH 340mm 3878 3878(8.1%) 3886(8.3%) 
GGT 4NA 405mm 1418 1539(8.5%) 1612(13.7%) 
GGT 4NB 405mm 1475 1739(17.9%) —— 
ALP 4NA(PH10) 405mm 757 825(8.9%) —— 
注:1校準物為寶靈曼c.f.a.s,試劑也用寶靈曼的配套試劑。
    2括號內(nèi)數(shù)字是該K值與理論K值相比的變化率
    以上摘自張克堅文章中

* 從上述K值中不難發(fā)現(xiàn)實測K值大于理論K值,這說明生化分析儀的測光系統(tǒng)還存在著一定誤差,如波長、半寬度及光徑等偏差,使儀器達不到理論上的最佳狀態(tài);
* 校準K值與實測K值之間也存在一定的差距,即使指示物和儀器相同,其差異可能由試劑及校準品造成的;
* 作者認為最好使用校準K值,但必須由兩個先決條件:1必須使用配套的試劑;2必須使用配套的高質(zhì)量的校準品,但校準K值應有其溯源性。
    關(guān)于酶活標準品,歐洲標準局(BCR)和美國國家標準技術(shù)研究院(NIST)均發(fā)表了人血清基質(zhì)的酶活性標準物,相信不久將會有公認的標準(校準)品問世。

八、 必須擬訂校準計劃(文件)
    校準工作不是僅進行一次就可萬事無憂一勞永逸,而必須經(jīng)?;?。按照“臨床實驗室質(zhì)量控制(QC)的要求(草案)”必須要求擬定校準計劃,其內(nèi)容包括:
    1.建立校準方法
      ⑴選擇合適(配套)的校準品,包括校準品數(shù)目、類型和濃度;
      ⑵如有可能校準品應溯源到參考方法或參考物質(zhì);
      ⑶確定校準的頻度。至少每六個月進行一次校準;
      ⑷如有下列情況發(fā)生時,必須進行校準
* 改變試劑的種類,或者批號更換了。如果實驗室能說明改變試劑批號并不影響結(jié)果的范圍,則可以不進行校準;
* 儀器或者檢驗系統(tǒng)進行一次大的預防性維護或者更換了重要部件,這些都有可能影響檢驗性能;
* 質(zhì)控反映出異常的趨勢或偏移,或者超出了實驗室規(guī)定的接受限,采取一般性糾正措施后,不能識別和糾正問題時;
2.每個實驗室對每臺儀器必需要有校準計劃。每次校準必須有詳情的記錄和分析。每次校準記錄必須保存?zhèn)洳椤?/font>

 





 
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