一、概要
孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體，又名堿性綠、嚴基塊綠、孔雀綠，其既是殺真菌劑，又是染料，易溶于水，溶液呈藍綠色。長期以來，漁民都用它來預(yù)防魚的水霉病、鰓霉病、小瓜蟲病等，而且為了使鱗受損的魚延長生命，在運輸過程中和存放池內(nèi)，也常使用孔雀石綠。
孔雀石綠檢測試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測產(chǎn)品，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。
二、試驗原理
孔雀石綠檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被孔雀石綠抗原，樣品殘留的孔雀石綠和微孔條上預(yù)包被的抗原共同競爭抗孔雀石綠抗體，加入酶標(biāo)二抗后，經(jīng)TMB底物顯色，樣品吸光度值與其殘留物孔雀石綠呈負相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中孔雀石綠的含量。
三、適用范圍
孔雀石綠檢測試劑盒可定性、定量檢測魚池或者魚缸水樣中的孔雀石綠殘留。
四、交叉反應(yīng)率
顯性孔雀石綠 ……………………………………………100%
結(jié)晶紫 ……………………………………………………180%
五、檢測步驟
測定前應(yīng)須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣品和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔所在的位置。
5 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品50μl/孔到對應(yīng)的微孔中，然后加入抗試劑50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250μl/孔，充分洗滌4～5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、加酶標(biāo)物：加入酶標(biāo)物100μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min，取出重復(fù)洗板步驟6。
8、顯色：加入底物液A液50μl/孔，再加底物液B液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15～20min。
9、測定：加入終止液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。（若無酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測法可進行判定）。
六、孔雀石綠檢測試劑盒靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.1ppb
樣品最低檢測限：
水樣………………………………………………………0.2ppb
回收率：
水樣……………………………………………………100±10%
精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%
七、注意事項
1、整個樣品處理過程要迅速，不應(yīng)放置過長，以防影響檢測結(jié)果。
2、室溫低于20℃或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
3、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。
4、每加一種試劑前需將其搖勻。
5、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
6、不要使用過了有效日期的試劑盒；不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
7、儲存條保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
8、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。
9、濃縮洗滌液內(nèi)部如有結(jié)晶屬正?，F(xiàn)象，請加熱溶解后使用。
10、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到30min。反之，則減短反應(yīng)時間。
11、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
八、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月。
