一、概要
三聚氰胺是一種低毒、無味的純白色單斜棱晶體，形似蛋白粉，屬于三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，廣泛應(yīng)用于塑料、染料、化肥的生產(chǎn)和紡織行業(yè)。由于三聚氰胺分子含氮量很高，只要添加到食品中就可在檢測中造成蛋白質(zhì)含量較高的假象。目前在飼料、牛奶、奶粉、餅干、奶糖等相關(guān)產(chǎn)品均發(fā)現(xiàn)有三聚氰胺殘留現(xiàn)象。動物實驗結(jié)果表明，三聚氰胺的攝入可能會導(dǎo)致繁殖障礙、膀胱炎、慢性腎炎、腎結(jié)石、甚至膀胱癌?，F(xiàn)有的檢測三聚氰胺方法如液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、質(zhì)譜電噴射離子技術(shù)其樣品前處理復(fù)雜、所需儀器昂貴、操作復(fù)雜、耗費時間。而使用三聚氰胺ELISA試劑盒能夠既快速又準(zhǔn)確的分析樣品中三聚氰胺殘留。
三聚氰胺檢測試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測產(chǎn)品，操作時間短于45min，能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。
二、試驗原理
三聚氰胺檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被三聚氰胺抗原，樣本殘留的三聚氰胺和微孔條上預(yù)包被的抗原競爭抗三聚氰胺抗體，同時三聚氰胺抗體與酶標(biāo)二抗相結(jié)合，加入TMB底物顯色，樣本吸光值與其殘留物三聚氰胺成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣本中三聚氰胺的含量。
適用范圍:
三聚氰胺檢測試劑盒可定性、定量檢測牛奶、奶粉、飼料、動物組織和雞蛋等樣本中三聚氰胺的殘留量。
交叉反應(yīng)率:
三聚氰胺………………………………………………100%
三、檢測步驟：
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50l/孔到對應(yīng)的微孔中，再加入酶標(biāo)物50l/孔，再加入抗試劑50l/孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300l/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫25℃避光環(huán)境反應(yīng)15min。
8、測定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。(若無酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測法可進(jìn)行判定)。
四、檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒靈敏度：10ppb
樣本最低檢測限：
牛奶………………………………………………100ppb
雞蛋………………………………………………100ppb
組織………………………………………………100ppb
奶粉…………………………………………… 500ppb
飼料…………………………………………… 500ppb
回收率：
牛奶………………………………………………… 110±10%
雞蛋………………………………………………… 90±10%
組織………………………………………………… 80±10%
奶粉………………………………………………… 80±10%
飼料………………………………………………… 80±10%
精密度：
試劑盒的變異系數(shù)均小于10%
五、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月。
