愛爾蘭總膳食纖維檢測試劑盒上?；菡\生物

1.簡介：

膳 食纖維是指碳水化合物及其相類似物質(zhì)的總和，包括多糖、寡糖、木質(zhì)素以及相關(guān)的植物物質(zhì)。主要有纖維素、半纖維素、果膠及親水膠體物質(zhì)，如樹膠、海藻多糖 等組分；另外還包括植物細(xì)胞壁中所含有的木質(zhì)素；不被人體消化酶所分解的物質(zhì)，如抗性淀粉、抗性糊精、抗性低聚糖、改性纖維素、黏質(zhì)、寡糖以及少量相關(guān)成 分，如蠟紙、角質(zhì)、軟木脂等。

總膳食纖維檢測試劑盒是根據(jù)AOAC991.43，AOAC 985.29，AACC32-07和AACC 32-05方法開發(fā)的，也適用于其它方法，如AACC Method 32-21，AACC method32-06。

2.檢測原理

脫脂（如大于10%）干燥后的樣品經(jīng)熱穩(wěn)定a-淀粉酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化，酶解液通過乙醇沉淀、過濾，乙醇和丙酮洗滌殘渣后干燥、稱重，得到總膳食纖維（TDF）殘渣；

酶解液通過直接過濾、熱水洗滌殘渣，干燥后稱重，得到不溶性膳食纖維（IDF）殘渣；

濾液用乙醇沉淀，過濾、干燥、稱重，得到可溶性膳食纖維（SDF）殘渣。

TDF、IDF和SDF的殘渣扣除蛋白質(zhì)、灰分和空白即得TDF、IDF和SDF含量。

該檢測試劑盒的主要優(yōu)勢在于直接提供高純度的酶，酶的活力是標(biāo)準(zhǔn)化的，而標(biāo)準(zhǔn)化的a-淀粉酶的活力在測量抗性淀粉是公認(rèn)的。

淀粉葡萄糖苷酶中基本沒有纖維素酶，而其他常用的酶制劑中常含有這種污染物，這將導(dǎo)致溶解和低估β-葡聚糖。

該試劑盒提供的酶都是穩(wěn)定的液體，可以保存到試劑盒有效期，并且是直接應(yīng)用液，不需要使用前再溶解。

3.用途

適用于檢測谷物、水果、蔬菜和加工食品中的總膳食纖維（TDF）、不溶性

膳食纖維（IDF）和可溶性膳食纖維（SDF）的檢測。

4.提供試劑及材料

每一個盒中的提供的酶試劑足夠進(jìn)行200個試驗，如另外需要可單獨訂貨：

Bottle 1，1瓶：

熱穩(wěn)定a-淀粉酶（20mL，~ 3,000 U/mL，Ceralpha method；~ 10,000 U/mL on

soluble starch。).

Bottle 2，1瓶：

純化的蛋白酶(20mL，50 mg/mL; ~ 350 tyrosine Units/mL。)

Bottle 3，2瓶:

淀粉葡萄糖苷酶(20mL，3300 U/mL on soluble starch。)

總計：80ml（4瓶20ml包裝）

另外，實驗中需要用到硅藻土：

酸洗硅藻土Celite?545，100g或500g包裝，（貨號：G-CEL100，G-CEL500)

其他相關(guān)試劑盒：

膳食纖維質(zhì)控試劑盒（貨號：K-TSCK）

質(zhì)控試劑盒用于檢驗酶的效力和純度，含下表中所列物質(zhì)每種一瓶，并附有技術(shù)數(shù)據(jù)單(K-TSCK)，盒中每種物質(zhì)足夠10次測試用。

5.需要的設(shè)備和試劑

5.1設(shè)備

A.高型無導(dǎo)流口燒杯：400mL或600mL

B.坩堝：具粗面燒結(jié)玻璃板，孔徑40-60 μm。清洗后在馬福爐中525℃灰化6小時或過夜，用真空泵除去硅藻土和灰分，室溫下用2%清洗液浸泡1小時，用水和蒸餾水沖洗干凈，用15 mL丙酮沖洗后風(fēng)干，加1g硅藻土到干燥的坩堝中，在130℃干燥至恒重，在干燥器中冷卻1小時，記下坩堝（包括硅藻土）的重量。

C.真空溶劑過濾裝置：真空泵或有調(diào)節(jié)裝置的抽吸器，1L的抽濾瓶，側(cè)壁有抽濾口，以及抽濾瓶配套的橡膠塞。用于酶解液的抽濾。

D.恒溫振蕩水?。?5-100℃

E.分析天平：感量0.1mg

F.天平（臺秤）：4 000g量程，感量0.1g

G.馬福爐：525±5°C，

H.烘箱：103±2℃，130±3℃

I.真空干燥箱

J.干燥器：二氧化硅或等同干燥劑

K. PH計，具有溫度補償功能。

L.微量凱氏定氮儀。

M.移液器，50-200 μL，5 mL，一次性移液吸頭。

N.計時器。

O.橡膠刮勺

P.磁力攪拌器

5.2試劑

A. 95%乙醇（體積比），

B. 78 %乙醇：取821mL95%乙醇置于容量瓶中，用水稀釋到刻度，混勻。

C.丙酮

D.蒸餾水或去離子水

E.清洗液Micro (International Products Corp.,Trenton,NJ).，配成2%液體

F. MES/TRIS緩沖液（0.05mol/L）:稱取19.52g(MES) (Sigma, M 8250)和14.2 g

(TRIS)(Sigma,T1503)




膳食纖維檢測試劑盒是根據(jù)AOAC991.43，AOAC 985.29，AACC32-07和AACC 32-05方法開發(fā)的，也適用于其它方法，如AACC Method 32-21，AACC method32-06。

2. 檢測原理
脫脂（如大于10%）干燥后的樣品經(jīng)熱穩(wěn)定a-淀FEN酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化，酶解液通過乙醇沉淀、過濾，乙醇和丙酮洗滌殘渣后干燥、稱重，得到總膳食纖維（TDF）殘渣；
酶解液通過直接過濾、熱水洗滌殘渣，干燥后稱重，得到不溶性膳食纖維（IDF）殘渣；
濾液用乙醇沉淀，過濾、干燥、稱重，得到可溶性膳食纖維（SDF）殘渣。
TDF、IDF和SDF的殘渣扣除蛋白質(zhì)、灰分和空白即得TDF、IDF和SDF含量。
該 檢測試劑盒的主要優(yōu)勢在于直接提供高純度的酶，酶的活力是標(biāo)準(zhǔn)化的，而標(biāo)準(zhǔn)化的a-淀FEN酶的活力在測量抗性淀粉是公認(rèn)的。淀粉葡萄糖苷酶中基本沒有纖維素酶，而其他常用的酶制劑中常含有這種污染物，這將導(dǎo)致溶解和低估β-葡聚糖。該試劑盒提供的酶都是穩(wěn)定的液體，可以保存到試劑盒有效期，并且是直接應(yīng)用液，不需要使用前再溶解。
3. 用途
適用于檢測谷物、水果、蔬菜和加工食品中的總膳食纖維（TDF）、不溶性
膳食纖維（IDF）和可溶性膳食纖維（SDF）的檢測。
4. 提供試劑及材料
每一個盒中的提供的酶試劑足夠進(jìn)行200個試驗，如另外需要可單獨訂貨：
Bottle 1 ，1瓶：
熱穩(wěn)定a-淀FEN酶（20mL，~ 3,000 U/mL，Ceralpha method；~ 10,000 U/mL on
soluble starch。).

Bottle 2，1瓶：
純化的蛋白酶(20mL，50 mg/mL; ~ 350 tyrosine Units/mL。)

Bottle 3，2瓶:
淀粉葡萄糖苷酶(20mL，3300 U/mL on soluble starch。)

總計：80ml（4瓶20ml包裝）

另外，實驗中需要用到硅藻土：
酸洗硅藻土Celite?545， 100g或500g包裝，（貨號：G-CEL100，G-CEL500)
其他相關(guān)試劑盒：
膳食纖維質(zhì)控試劑盒（貨號：K-TSCK）
質(zhì)控試劑盒用于檢驗酶的效力和純度，含下表中所列物質(zhì)每種一瓶，并附有技術(shù)數(shù)據(jù)單(K-TSCK)，盒中每種物質(zhì)足夠10次測試用。
 

品種	數(shù)量
β-葡聚糖（大麥）	1.0g
高直鏈玉米淀粉	10.0g
淀粉（小麥）	10.0g
酪蛋白	5.0g
果膠	1.0g

 5. 需要的設(shè)備和試劑
5.1 設(shè)備
A. 高型無導(dǎo)流口燒杯：400mL或600mL
B. 坩堝：具粗面燒結(jié)玻璃板，孔徑40-60 μm。清洗后在馬福爐中525℃灰化6小時或過夜，用真空泵除去硅藻土和灰分，室溫下用2%清洗液浸泡1小時，用水和蒸餾水沖洗干凈，用15 mL丙酮沖洗后風(fēng)干，加1g硅藻土到干燥的坩堝中，在130℃干燥至恒重，在干燥器中冷卻1小時，記下坩堝（包括硅藻土）的重量。
C. 真空溶劑過濾裝置：真空泵或有調(diào)節(jié)裝置的抽吸器，1L的抽濾瓶，側(cè)壁有抽濾口，以及抽濾瓶配套的橡膠塞。用于酶解液的抽濾。
D. 恒溫振蕩水浴：95-100℃
E. 分析天平：感量0.1mg
F. 天平（臺秤）：4 000g量程，感量0.1g
G. 馬福爐：525±5°C，
H. 烘箱：103±2℃，130±3℃
I. 真空干燥箱
J. 干燥器：二氧化硅或等同干燥劑
K. PH計，具有溫度補償功能。
L. 微量凱氏定氮儀。
M. 移液器，50-200 μL，5 mL，一次性移液吸頭。
N. 計時器。
O. 橡膠刮勺
P. 磁力攪拌器
5.2 試劑
A. 95%乙醇（體積比），
B. 78 %乙醇：取821mL95%乙醇置于容量瓶中，用水稀釋到刻度，混勻。
C. 丙酮
D. 蒸餾水或去離子水
E. 清洗液Micro (International Products Corp.,Trenton,NJ).，配成2%液體
F. MES/TRIS緩沖液（0.05mol/L）:稱取19.52g (MES) (Sigma, M 8250)和14.2 g
(TRIS) (Sigma,T1503)，用1.7L蒸餾水溶解，用6mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH至
8.2±0.1，加水稀釋到2L（注意24℃時PH值為8.2，20℃時PH值為8.3，27-28℃
時PH值為8.1）
G. 鹽酸溶液（0.561 mol/L）：取93.5mL 6 mol/L的鹽酸，加入700mL水中，混勻
后用水定容到1L。
H. 氫氧化鈉
I. PH值標(biāo)準(zhǔn)緩沖液：PH值為 4.0，7.0 和10.0。
6. 酶的純化和標(biāo)準(zhǔn)化
6.1 根據(jù)AACC/AOAC的膳食纖維檢測方法，必須確保酶的純度。
6.1.1 淀粉葡萄糖苷酶被木聚糖酶、纖維素酶和果膠酶污染，會低估β-葡聚糖、
阿拉伯木聚糖和果膠的含量。
6.1.2 熱穩(wěn)定a-淀粉酶被污染，會影響抗性淀粉的測量。
6.1.3 蛋白酶被4-β-葡聚糖酶污染，會低估β-葡聚糖的含量。
6.1.4 如不是使用該的酶，請參考下面方法測定

上?；菡\生物優(yōu)勢品牌系列: 

藥物: TRC  LGC  USP  LKT 

植提標(biāo)準(zhǔn)品: Extrasynthese  PhytoLab  Chromadex  CaroteNature

糖類: Elicityl  TDB  Ludger  Megazyme  Glycarbo

脂類: Nu-Chek  Larodan  Avanti  Matreya

其他: TCI  ERM  Wako  Jackson  Cayman  laysan  Alfa  阿拉丁  麥克林

 

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