建立止喘口服液中鹽酸麻黃堿的含量測定法。方法：采用高效液相色譜法，選用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動相為乙腈?0.1%磷酸溶液(10∶90，V/V)；檢測波長：207 nm；流速0.7 mL/min；進(jìn)樣量20 μL；柱溫：室溫。結(jié)果：鹽酸麻黃堿在4.5～27.0 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 8，n=6)，平均回收率為98.99%，RSD為0.96%。結(jié)論：本法簡便快捷、靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于止喘口服液中鹽酸麻黃堿的質(zhì)量控制。 1 材料SHIMDZU高效液相色譜儀，SPD?10A紫外檢測器，Class?vp色譜工作站(日本島津)，鹽酸麻黃堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，含量測定用，批號171242?200405)，止喘口服液［批準(zhǔn)文號：贛藥制字(2004)第H0304號，江西省兒童醫(yī)院制劑室自制］；乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為純化水。
2 方法與結(jié)果2.1 色譜條件色譜柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：乙腈?0.1%磷酸溶液(10∶90，V/V)；檢測波長：207 nm；流速0.7 mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量20 μL。在此條件下鹽酸麻黃堿與其它組分能達(dá)到基線分離，理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿計算應(yīng)不低于6 000。
2.2 溶液的制備2.2.1 對照品溶液 精密稱取105 ℃干燥至恒重的鹽酸麻黃堿對照品適量，加流動相制成15 mg/L的溶液，作為儲備液，備用。
2.2.2 供試品溶液 精密量取止喘口服液2 mL，置于25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。用0.45 μm微孔濾膜過濾。精密量取續(xù)濾液2 mL，置于10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.2.3 陰性對照液 按處方比例及工藝，制備缺鹽酸麻黃堿的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備不含鹽酸麻黃堿的陰性樣品溶液。
2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性及專屬性考察分別吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各20 μL注入高效液相色譜儀，陰性對照品在鹽酸麻黃堿峰位置處無吸收峰，即其它成分對測定無干擾，鹽酸麻黃堿峰與其它組分峰基線分離良好，見圖1，對照品溶液及供試品溶液主峰的保留時間一致，保留時間約13 min。
2.4 線性關(guān)系考察精密吸取對照品儲備液適量，用流動相稀釋至4.5、9.0、13.5、18.0、22.5、27.0 mg/L 6個不同濃度，在上述色譜條件下，精密量取以上溶液各20 μL，注入。
液相色譜儀，以峰面積Y對濃度X進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=58 647.6X 20 917.1，r=0.999 8，n=6，在4.5～27.0 mg/L濃度范圍內(nèi)峰面積對濃度的線性關(guān)系良好。
2.5 進(jìn)樣精密度試驗精密量取15 mg/L的對照品儲備液0.18 mL，于100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，得濃度為0.027 mg/mL鹽酸麻黃堿對照品溶液，在上述色譜條件下，取上述溶液20 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，以峰面積計算精密度，測得鹽酸麻黃堿峰面積值為1 609 964、1 591 984、1 610 760、1 616 328、1 620 406，RSD為0.68%，表明精密度良好。
2.6 重復(fù)性試驗取同一批口服液5份，按“2.2.2”項下供試品處理方法處理樣品，按上述色譜條件測定，測得樣品鹽酸麻黃堿含量分別為12.14、12.54、12.51、12.60、12.78 mg/L，RSD為0.12%，表明重復(fù)性良好。
2.7 穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12 h進(jìn)行測定，其含量RSD為0.15%，表明12 h內(nèi)測定結(jié)果基本穩(wěn)定。
2.8 加樣回收試驗精密移取已知含量的樣品9份，分別加入高、中、低3個濃度的鹽酸麻黃堿對照品各3份，在上述色譜條件下，每次進(jìn)樣20 μL，注入高效液相色譜儀。
2.9 樣品測定取4批次樣品，按供試品溶液的制備方法制備，另精密稱取鹽酸麻黃堿對照品適量，配成一定的濃度(13.44 mg/L)，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μL，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算含量。
3 討論用高效液相色譜法測定鹽酸麻黃堿的含量，不同的文獻(xiàn)報道，檢測波長、流動相有所不同。
圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示鹽酸麻黃堿在207 nm處有最大吸收，且其它組分在該波長處無干擾，因此，選擇該波長作為檢測波長。曾以乙腈?磷酸二氫鉀緩沖液、甲醇?水、甲醇?0.01 mol/L磷酸氫二鉀為流動相，鹽酸麻黃堿有拖尾峰出現(xiàn)，分離效果差，而以乙腈?0.1%磷酸溶液為流動相，鹽酸麻黃堿在4.5～27.0 mg/L范圍內(nèi)，溶液的濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，檢測靈敏度高，保留時間適宜。
本實驗采用高效液相色譜法測定止喘口服液中鹽酸麻黃堿的含量，確定了色譜條件及檢測濃度范圍，本方法簡便、快速、準(zhǔn)確，解決了紫外分光光度法測定時樣品處理繁瑣費時造成的誤差。采用紫外分光光度法測定，在樣品處理時需精密加入茚三酮溶液(臨用新配)，用1%碳酸鈉溶液調(diào)pH至7.8～7.9，然后置水浴中加熱10 min，迅即放冷，精密加水7 mL再測定。而采用HPLC法樣品只需過濾稀釋后直接進(jìn)樣，節(jié)省了時間，也節(jié)約了試劑，適用于鹽酸麻黃堿的含量測定。
2 方法與結(jié)果2.1 色譜條件色譜柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：乙腈?0.1%磷酸溶液(10∶90，V/V)；檢測波長：207 nm；流速0.7 mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量20 μL。在此條件下鹽酸麻黃堿與其它組分能達(dá)到基線分離，理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿計算應(yīng)不低于6 000。
2.2 溶液的制備2.2.1 對照品溶液 精密稱取105 ℃干燥至恒重的鹽酸麻黃堿對照品適量，加流動相制成15 mg/L的溶液，作為儲備液，備用。
2.2.2 供試品溶液 精密量取止喘口服液2 mL，置于25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。用0.45 μm微孔濾膜過濾。精密量取續(xù)濾液2 mL，置于10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.2.3 陰性對照液 按處方比例及工藝，制備缺鹽酸麻黃堿的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備不含鹽酸麻黃堿的陰性樣品溶液。
2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性及專屬性考察分別吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各20 μL注入高效液相色譜儀，陰性對照品在鹽酸麻黃堿峰位置處無吸收峰，即其它成分對測定無干擾，鹽酸麻黃堿峰與其它組分峰基線分離良好，見圖1，對照品溶液及供試品溶液主峰的保留時間一致，保留時間約13 min。
2.4 線性關(guān)系考察精密吸取對照品儲備液適量，用流動相稀釋至4.5、9.0、13.5、18.0、22.5、27.0 mg/L 6個不同濃度，在上述色譜條件下，精密量取以上溶液各20 μL，注入。
液相色譜儀，以峰面積Y對濃度X進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=58 647.6X 20 917.1，r=0.999 8，n=6，在4.5～27.0 mg/L濃度范圍內(nèi)峰面積對濃度的線性關(guān)系良好。
2.5 進(jìn)樣精密度試驗精密量取15 mg/L的對照品儲備液0.18 mL，于100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，得濃度為0.027 mg/mL鹽酸麻黃堿對照品溶液，在上述色譜條件下，取上述溶液20 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，以峰面積計算精密度，測得鹽酸麻黃堿峰面積值為1 609 964、1 591 984、1 610 760、1 616 328、1 620 406，RSD為0.68%，表明精密度良好。
2.6 重復(fù)性試驗取同一批口服液5份，按“2.2.2”項下供試品處理方法處理樣品，按上述色譜條件測定，測得樣品鹽酸麻黃堿含量分別為12.14、12.54、12.51、12.60、12.78 mg/L，RSD為0.12%，表明重復(fù)性良好。
2.7 穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12 h進(jìn)行測定，其含量RSD為0.15%，表明12 h內(nèi)測定結(jié)果基本穩(wěn)定。
2.8 加樣回收試驗精密移取已知含量的樣品9份，分別加入高、中、低3個濃度的鹽酸麻黃堿對照品各3份，在上述色譜條件下，每次進(jìn)樣20 μL，注入高效液相色譜儀。
2.9 樣品測定取4批次樣品，按供試品溶液的制備方法制備，另精密稱取鹽酸麻黃堿對照品適量，配成一定的濃度(13.44 mg/L)，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μL，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算含量。
3 討論用高效液相色譜法測定鹽酸麻黃堿的含量，不同的文獻(xiàn)報道，檢測波長、流動相有所不同。
圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示鹽酸麻黃堿在207 nm處有最大吸收，且其它組分在該波長處無干擾，因此，選擇該波長作為檢測波長。曾以乙腈?磷酸二氫鉀緩沖液、甲醇?水、甲醇?0.01 mol/L磷酸氫二鉀為流動相，鹽酸麻黃堿有拖尾峰出現(xiàn)，分離效果差，而以乙腈?0.1%磷酸溶液為流動相，鹽酸麻黃堿在4.5～27.0 mg/L范圍內(nèi)，溶液的濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，檢測靈敏度高，保留時間適宜。
本實驗采用高效液相色譜法測定止喘口服液中鹽酸麻黃堿的含量，確定了色譜條件及檢測濃度范圍，本方法簡便、快速、準(zhǔn)確，解決了紫外分光光度法測定時樣品處理繁瑣費時造成的誤差。采用紫外分光光度法測定，在樣品處理時需精密加入茚三酮溶液(臨用新配)，用1%碳酸鈉溶液調(diào)pH至7.8～7.9，然后置水浴中加熱10 min，迅即放冷，精密加水7 mL再測定。而采用HPLC法樣品只需過濾稀釋后直接進(jìn)樣，節(jié)省了時間，也節(jié)約了試劑，適用于鹽酸麻黃堿的含量測定。
