手把手教你霉菌斜面轉(zhuǎn)接培養(yǎng)

一、開箱檢查:

打開包裝箱，查看斜面是否破損，菌株編號與說明書是否一致。

二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:

仔細(xì)閱讀菌株說明書，準(zhǔn)備2個(gè)新鮮平板或斜面。

三、器材滅菌:

斜面試管表面消毒后，轉(zhuǎn)移至生物安全柜中，管口灼燒滅菌冷卻備用。接種鋤和接種鏟在酒精燈外焰翻轉(zhuǎn)灼燒滅菌3-5分鐘，冷卻備用，冷卻后用接種鋤在斜面上相距0.5cm處切兩條平行線（與試管垂直）。

四、切分斜面:

換接種鏟在兩條平行線之間相距0.5cm處切兩條平行線（與試管平行），形成0.5cm*0.5cm的小正方形菌塊。

五、霉菌轉(zhuǎn)接:

用接種鏟挑取菌塊平放到平板或斜面（固體瓊脂表面）上（菌塊正面朝上）。轉(zhuǎn)接多個(gè)平板或斜面，重復(fù)以上操作即可。

六、完成培養(yǎng):

平板正放，斜面傾斜放置于霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（參照菌種說明書上的培養(yǎng)條件設(shè)置溫度）

（1） 實(shí)驗(yàn)材料 

根霉，毛霉，黑曲霉，青霉，土豆瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿，載玻片，蓋玻片，鑷子，顯微鏡，小刀，U形管等。 

（2） 實(shí)驗(yàn)步驟  

1、配置培養(yǎng)基：根據(jù)原料用量配置土豆培養(yǎng)基。配置時(shí)，先急火煮沸，在溫火加熱20min，若有渾濁出現(xiàn)，則需過濾，然后定容。包扎土豆培養(yǎng)基，甘油等其他用品。滅菌后取出備用2、培養(yǎng)小室準(zhǔn)備及滅菌 在培養(yǎng)皿底部鋪一張略小于皿底的圓形濾紙片，濾紙片上依次放上“U”形載玻片擱架、載玻片、蓋玻片-四片，蓋上皿蓋，牛皮紙包扎，于恒溫干燥箱中121℃滅菌30min烘干備用；

 2、瓊脂薄片制作：

a) 將稍微冷卻的培養(yǎng)基，倒在培養(yǎng)皿 中，做成薄平板。培養(yǎng)基應(yīng)該要倒 得薄而均勻。注意無菌操作。

b) 用解剖刀將瓊脂薄平板切成邊長不大于1cm的瓊脂薄片

c) 用解剖刀將瓊脂薄片移至小室載玻片上（一個(gè)載玻片上方兩塊薄片）

3、取菌接種：用接種環(huán)挑取少量待觀察的霉菌孢子（霉菌菌種的表面輕輕刮取即可），接種于固體培養(yǎng)基邊緣，以便于霉菌生長。接種時(shí)只要將帶菌的接種環(huán)在載玻片上輕輕碰幾下即可。接種量要少，以免培養(yǎng)后菌絲過于稠密而影響觀察。

4、加蓋玻片：用無菌鑷子將皿內(nèi)的蓋玻片蓋在瓊脂薄層上，用鑷子輕壓蓋玻片，使蓋玻片和載玻片之間的距離相當(dāng)接近，但不能壓扁。蓋玻片不能緊貼載玻片，要彼此留有小縫隙，一是為了通氣，二是使各部分結(jié)構(gòu)平行排列，易于觀察。

5、倒保濕劑：每皿倒入約2-3mL 20%的經(jīng)滅菌處理的甘油，使皿內(nèi)濾紙完全濕潤，以保持皿內(nèi)濕度，蓋上皿蓋。制成載玻片濕室。
6、正置培養(yǎng)：將平皿置于27℃霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一周。

7、觀察： 將培養(yǎng)好的載玻片取出，置于顯微鏡下直接觀察。 

（3）實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果 

1.根霉：菌絲無隔，有假根、匍匐菌絲。假根著生處有向上直立的孢囊梗，其頂端膨大成孢子囊，底部為半球形囊軸。

2.毛霉：孢囊梗直接由菌絲出，頂端為球形孢子囊 

3.黑曲霉：菌絲有隔，氣生菌絲分化為分生孢子梗（無隔），頂端 膨脹為球狀頂囊。

4.青霉：菌絲有隔，分生孢子梗頂端不膨大，無頂囊，多次分枝成幾輪小梗，小梗頂端長孢子。分生孢子梗呈掃帚狀。