昨天分享了答疑系列的第一部分：乳制品微生物實驗室技能提升培訓系列答疑之一：微生物法測定維生素篇（一），今天分享繼續(xù)！
1.老師，就是對于生物素和葉酸曲線和理化的標準曲線是有區(qū)別的，不用追求R值嗎？
標準曲線代表是微生物的生長趨勢，不同于理化檢驗的化學標準品的含量曲線，R值是趨勢線擬合程度的指標，手繪標準曲線或者Excel這兩種方式獲得的結(jié)果差異不大，均不必要體現(xiàn)R值，可以省略。
2.老師，是直接吸取一定體積的中間液加入固體奶粉樣品中進行加標回收嗎？
是的，直接混合再加提取液，算在第一步的整體的稀釋液體積里。
3.老師，你們的不銹鋼試管帽是定制的嗎？用的是螺旋口的試管嗎？
是實驗室自己定制的，不銹鋼材質(zhì)。
菌種的傳代和菌懸液的制備都是用的螺口試管，易于保存和離心。
4.可以分享下葉酸的培養(yǎng)基嗎？BD好像買不到了？有用國產(chǎn)培養(yǎng)基好的推薦嗎?
本試驗現(xiàn)在用是博源諾信的葉酸培養(yǎng)基，貨號（F82210），對應(yīng)菌株是ATCC7469，效果可以。
5.老師，我們現(xiàn)在買不到大于99%的葉酸標準品，這個怎么辦？
進行換算，比如買的標準品是95％的葉酸培養(yǎng)基，那么就用20mg除以95%，再除以1000，得到標準品的稱取的量為0.0211g（21.1mg）。
6.老師，標準曲線的制作是否可以選擇其中的部分點進行，不滿足8管，只有5、6管時是否可以做標準曲線？
標準曲線的制作要按照標準的要求，滿足8個點，每個點保證3管平行，保證每個點都有數(shù)值進行標準曲線的繪制。
7.老師，VB12紫外測定為何有兩個波長？
GB5413.14-2010標準中描述的波長為550nm，待發(fā)布的新標準GB5009.XX-XXXX給出的波長是630nm。兩者差別不大。
8.老師，請問如何減少加標體積對樣品稀釋體積的影響？
選擇好加標量后，無論選擇哪個濃度的標準液進行添加，都要確保低于第一步的稀釋倍數(shù)即定容的容量瓶的體積，實際添加時很好區(qū)分應(yīng)該加哪個濃度的標準溶液。
9.老師，維生素b12傳代用專用培養(yǎng)基還是LB？
都可以，萊士曼氏乳桿菌比其他的維生素測定菌株需要的營養(yǎng)成分更精細，最好選用專用的，保證菌株活性。
10.老師，葉酸和VB12檢測時，在待測液制作環(huán)節(jié)時，您強調(diào)培養(yǎng)基煮沸后立即晾涼，我們實際應(yīng)用是煮沸后自然晾晾，沒有立即冷卻，煮沸后到培養(yǎng)基使用大概用時2h。
要立即冷卻，培養(yǎng)基加熱時間長會顏色變深，破壞營養(yǎng)成分，煮沸后的培養(yǎng)基是輕微渾濁的，冷水浴后會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基變得澄清。
11.B12第二次調(diào)pH調(diào)到6.8不好調(diào)，那最終是看靜止的pH還是搖動的時候的pH？
吸取5mL到50ml小燒瓶中后，加入約20mL的水，這樣就能保證PH計探頭浸到液體里，用0.01moL的鹽酸和氫氧化鈉調(diào)PH，濃度太大控制不好。一邊搖勻一邊測定，最終看靜止讀數(shù)。
12.B12第二次調(diào)pH調(diào)到6.8不好調(diào)，那最終是看靜止的pH還是搖動的時候的pH？
吸取5mL到50ml小燒瓶中后，加入約20mL的水，這樣就能保證PH計探頭浸到液體里，用0.01moL的鹽酸和氫氧化鈉調(diào)PH，濃度太大控制不好。一邊搖勻一邊測定，最終看靜止讀數(shù)。
13.老師，生物素測定時，制備好的菌懸液可放多長時間？
一般24小時沒有問題，但也不建議儲存太長時間。按照樣品的數(shù)量和報數(shù)日期，合理安排時間準備菌懸液，盡量使用新鮮培養(yǎng)的菌懸液。
14.容量瓶的清洗有要求嗎？
每個實驗室都有玻璃容器的清洗規(guī)定，按照程序清洗即可，只是在清洗后，一定要170℃高溫滅菌3h后待用，該步驟不是為了滅菌，而且是為了去除掉器皿表面殘留的微生物代謝產(chǎn)生的維生素對目標物測定的影響。如果實驗室有條件和空間允許，維生素測定用的玻璃器皿單獨存放，不與其他實驗混用。
15.老師，請問直接用質(zhì)控樣來控制試劑盒的檢測結(jié)果可以嗎？
可以，對于生產(chǎn)企業(yè)，建議和質(zhì)控樣一起，用自己的產(chǎn)品作為試劑盒驗證的樣品。
16.sc煮沸滅菌，請問：煮沸幾分鐘合適？
SC的滅菌方式參考培養(yǎng)基適用說明，一般的煮沸滅菌目測培養(yǎng)基徹底溶解，溶液清亮為宜，SC培養(yǎng)基含有蛋白胨，主要使蛋白胨徹底溶解，分裝保存即可。
17.生物素試劑盒法和國標方法如果每年有方法比對，方法比對結(jié)果比較好，可不可以直接用試劑盒法
即使每年的比對結(jié)果比較理想，也不建議直接用是試劑盒法，這是一種持續(xù)能力保持的體現(xiàn)，如果方法比對結(jié)果比較好，品牌更換不頻繁，建議擴大產(chǎn)品適用范圍、用不同含量的樣品對試劑盒測試等來驗證試劑盒的效能。
來源：小編根據(jù)“乳制品微生物實驗室技能提升培訓班”老師課堂答疑匯總編輯整理整理，此文為原創(chuàng)文章，轉(zhuǎn)載請注明來源“食品微生物檢測”公眾號。
菌種的傳代和菌懸液的制備都是用的螺口試管，易于保存和離心。
