內(nèi)標(biāo)物和替代物定義：
內(nèi)標(biāo)物－－是加到樣品、提取物或標(biāo)準(zhǔn)溶液中已知量的純物質(zhì)，是用來(lái)測(cè)定同一溶液中其它分析物質(zhì)和替代物的相對(duì)響應(yīng)值。內(nèi)標(biāo)物質(zhì)必須是分析的樣品組分中所不含有的，一般是目標(biāo)物的氘代物，用來(lái)體現(xiàn)目標(biāo)物的基底效應(yīng)。
替代物－－是一種在任何樣品中都不可能被發(fā)現(xiàn)的純物質(zhì)，其在樣品提取和進(jìn)行其它處理前被加入的等分和量是已知的。它同樣品中其它組分一樣被測(cè)定，它的作用是監(jiān)控每個(gè)樣品的方法性能。
它是一種與目標(biāo)物性質(zhì)相近的物質(zhì)，一般在前處理之前加，用來(lái)表征整個(gè)前處理過(guò)程的損失或回收率。只是用來(lái)監(jiān)測(cè)萃取效率，一般認(rèn)為其回收率在某一范圍（不同標(biāo)準(zhǔn)要求不同）內(nèi)即認(rèn)為萃取結(jié)果可以定量作為檢查結(jié)果。
異同點(diǎn)
首先都要在標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入替代加標(biāo)物和內(nèi)標(biāo)，兩者最主要的區(qū)別在于加入的時(shí)間點(diǎn)，萃取前加入，通過(guò)最后萃取液的定量，可以確定整個(gè)過(guò)程的萃取效率及損失，而進(jìn)樣前加入可以修正進(jìn)樣誤差，替代加標(biāo)物如在標(biāo)液中選擇為內(nèi)標(biāo)，就可以修正全過(guò)程誤差，如果視為外標(biāo)，主要是監(jiān)控回收效率。
內(nèi)標(biāo)法在具體做的時(shí)候其實(shí)包括兩部分吧，一個(gè)是內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制；一個(gè)是樣品前處理。在繪制內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，縱、橫坐標(biāo)中，一個(gè)是濃度，一個(gè)比值（待分析物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比，內(nèi)標(biāo)物的濃度是固定的），待分析物的濃度是通過(guò)把比值（待分析物與內(nèi)標(biāo)物的比值）代入內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出的，樣品處理雖然會(huì)使內(nèi)標(biāo)物有所損失，但是由于待分析物與內(nèi)標(biāo)物濃度是同方向變化的，并不影響定量結(jié)果，這也是內(nèi)標(biāo)法的一個(gè)優(yōu)勢(shì)所在。
環(huán)境樣品應(yīng)用舉例
1.替代物的作用
替代物監(jiān)控樣品預(yù)處理過(guò)程中標(biāo)物的損失或玷污，樣品中不應(yīng)含替代物，替代物也不應(yīng)是目標(biāo)物，但應(yīng)是和目標(biāo)物的物理化學(xué)性質(zhì)相似的化合物，且能夠被定量測(cè)定。替代物在樣品預(yù)處理前定量加入樣品中，隨樣品走完預(yù)處理和儀器分析的全過(guò)程。
由于替代物不斷存在于樣品中，可以認(rèn)為替代物的損失或者玷污的程度，即回收率，能夠準(zhǔn)確測(cè)量。又由于替代物和目標(biāo)物的物理化學(xué)性質(zhì)相似，在預(yù)處理過(guò)程中兩者的損失或玷污的程度是一致的。因此，未知目標(biāo)物在預(yù)處理過(guò)程中的回收率，可由已知的替代物的回收率來(lái)衡量。這就是替代物在環(huán)境樣品的分析中的作用。
鑒于對(duì)替代物的要求，樣品的替代物通常是目標(biāo)物的同位素化合物。例如，測(cè)定多環(huán)芳烴時(shí)，可選用萘、二氫苊、菲、屈等的氘代化合物。它們的物理化學(xué)性質(zhì)與待測(cè)的目標(biāo)物極其相似，萃取過(guò)程中的損失或玷污是一致的。經(jīng)過(guò)氣相色譜柱的分離后，氘代多環(huán)芳烴可以與待測(cè)的多環(huán)芳烴部分分離。接在色譜后的質(zhì)譜檢測(cè)器，可把這些質(zhì)量數(shù)不同的氘代物檢出。由于氘代物在天然環(huán)境樣品中含量極微，替代物的回收率可視為目標(biāo)物的回收率。
2.內(nèi)標(biāo)物、替代物與回收率的關(guān)系
目標(biāo)物回收率的計(jì)算依靠?jī)?nèi)標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)物與替代物一樣，不應(yīng)在樣品中出現(xiàn)，也不應(yīng)是目標(biāo)物。但對(duì)其的物理化學(xué)性質(zhì)的要求不像替代物那么嚴(yán)，只要與目標(biāo)物相近，在檢測(cè)器上能被定量檢測(cè)就行。例如，在分析多環(huán)芳烴時(shí)，內(nèi)標(biāo)物可以是氘代物，也可以是甲基或硝基苯類化合物。內(nèi)標(biāo)物在每個(gè)樣品預(yù)處理后，儀器分析前加入樣品中，同處理過(guò)的試樣一起走完儀器分析的全過(guò)程。內(nèi)標(biāo)物的作用是計(jì)算替代物的回收率，美國(guó)EPA標(biāo)準(zhǔn)方法中也用來(lái)作定量分析的依據(jù)。
回收率過(guò)高或過(guò)低說(shuō)明操作過(guò)程有誤差，應(yīng)該避免。替代物的回收率在40％至120％間，
分析誤差在要求的范圍內(nèi)。這與傳統(tǒng)的加標(biāo)回收率必須達(dá)到近100％的要求有很大差別。
傳統(tǒng)的定量分析一般是利用工作 曲線來(lái)進(jìn)行的， 其間的內(nèi)標(biāo)物可校正儀器分析的誤差，對(duì)于預(yù)處理過(guò)程中誤差的校正無(wú)能為力，因此希望回收率接近100％。而采用替代物后，定量分析依靠替代物進(jìn)行，利用回收率對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行校正 。
