1.主題內(nèi)容與適用范圍
本方法規(guī)定了壓力蒸汽滅菌技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)及其評價(jià)滅菌效果的檢測方法。
本方法適用于對壓力蒸汽滅菌效果的評價(jià)。
2.試劑
本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑,凡未說明規(guī)格者,均為分析純(AR),水為蒸餾水。
2.1 蛋白胨
2.2 葡萄糖
2.3 溴甲酚紫酒精溶液:取溴甲酚紫2.0g,溶于100mL95%乙醇中。
2.4 溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基配制;蛋白胨10.0g,葡萄糖5.0g,溶于1000mL蒸餾水中,調(diào)pH值至7.0~7.2,然后再加2%溴甲酚紫酒精溶液0.6mL,搖勻后,按5mL/管,分裝包口,置壓力蒸汽滅菌器中,于115℃滅菌40min后備用。
3.指示菌
嗜熱脂肪桿菌芽胞(ATCC7953或SSI K31)菌片,含菌量為5×105~5x106/片,121℃下,殺滅90%微生物所需時(shí)間D121值為1.3~1.9min、殺滅時(shí)間（KT值)為≤19mm，存活時(shí)間(ST值)為≥3. 9min。
4.化學(xué)指示劑
需用衛(wèi)生部批準(zhǔn)的化學(xué)指示劑
5.技術(shù)要求
6.檢測方法
6.1 生物學(xué)指標(biāo)(用作壓力蒸汽滅菌設(shè)備滅菌效果的依據(jù))。
6.1.1 將嗜熱脂肪桿芽胞菌片兩個(gè)分別放入滅菌小紙袋內(nèi),置于標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包中心部位。
6.1.2 滅菌柜室內(nèi),上、中層中央和排氣口處各放置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包(由3件平紋長袖手術(shù)衣,4塊小手術(shù)巾,2塊中手術(shù)巾,1塊大手術(shù)巾，30塊10cm×10cm、8層紗布敷料包裹成25cmx30cmX30cm大小)。手提壓力蒸汽滅器用通氣貯物盒(2cm×13cm×6cm)代替標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包,盒內(nèi)盛滿中試管,指示菌片放于中心部位兩只滅菌試管內(nèi)(試管口用滅菌牛皮紙包封),將盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。
6.1.3 經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，在無菌條件下，取出標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包或通氣貯物盒中的指示菌片,投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中,56℃培養(yǎng)48h,觀察培養(yǎng)基顏色變化。
6.2 化學(xué)指標(biāo)
在物品包外用化學(xué)指示膠帶,可作為物品是否經(jīng)過滅菌的處理標(biāo)志,在物品包內(nèi)中心部位用化學(xué)指示劑,可作為物品是否滅菌的參考標(biāo)志。
7.結(jié)果判定及評價(jià)
7.1 同次檢測中,標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包或通氣貯物盒內(nèi),每個(gè)指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基全部不變色,判定為滅菌合格。指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色時(shí),判定為滅菌不合格。
7.2 化學(xué)指示劑的顏色變?yōu)榕c滅菌合格標(biāo)準(zhǔn)色相同時(shí),或熔化時(shí)作為滅菌合格的參考標(biāo)準(zhǔn)。
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; clear: both; min-height: 1em; font-size: 20px; line-height: 20px;">紫外線表面消效果評價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)
8.主題內(nèi)容與適用范圍
本方法規(guī)定了物體表面消毒用紫外線的波長、強(qiáng)度及評價(jià)其消毒效果的物理學(xué)指標(biāo)和生物學(xué)檢測方法。
本方法適用于紫外線直接照射到的物體表面消毒效果評價(jià)。
9.指示菌
9.1 大腸桿菌(8099或ATCC 25922）。
9.2 枯草桿菌黑色變種芽胞(ATCC 9372）。
10.物理學(xué)指標(biāo)
10.1 在電壓220V時(shí),普通30W直管型紫外線燈,在室溫為20~25℃的使用情況下253.7nm紫外線輻射強(qiáng)度(垂直1m處)應(yīng)≥70uW/cm2。
10.2 在電壓220V時(shí),高強(qiáng)度紫外線燈,在室溫為20~25℃的使用情況下,253.7nm紫外線輻射強(qiáng)度（垂直1m處)應(yīng)≥200uW/cm2。
10.3 照射劑量按式(1)計(jì)算：
11.檢測方法
11.1 物理學(xué)檢測方法
11.1.1 燈管的紫外線強(qiáng)度(uW/cm2)用中心波長為253.7nm的紫外強(qiáng)度測定儀(標(biāo)定有效期內(nèi)），在燈管垂直位置1m處測定。
11.1.2 在實(shí)際應(yīng)用中消毒表面的照射強(qiáng)度應(yīng)以燈管與消毒對象的實(shí)際距離測定。
11.1.3 表面消毒接受的照射劑量,應(yīng)達(dá)殺滅目標(biāo)微生物所需。對大腸桿菌，照射劑量應(yīng)達(dá)到20000uW.s/cm2，對枯草桿菌黑色變種芽胞應(yīng)達(dá)到100000uW.s/cm2。
11.2 生物學(xué)檢測方法
11.2.1 采用載體定量消毒試驗(yàn)。載體制備按本標(biāo)準(zhǔn)附錄C進(jìn)行。
11.2.2 開啟紫外線燈5min后,將8個(gè)染菌玻片平放于滅菌器皿中,水平放于適當(dāng)距離照射,于4個(gè)不同間隔時(shí)間各取出2個(gè)染菌玻片,分別投入2個(gè)盛有5mL洗脫液(1%吐溫80，1%蛋白胨生理鹽水)試管中,振打80次。
11.2.3 經(jīng)適當(dāng)稀釋后,取0.5mL洗脫液,作平板傾注,每個(gè)染菌玻片接種兩個(gè),放37℃培養(yǎng)48h作活菌計(jì)數(shù)。
11.2.4 陽性對照,除不作照射處理外,取2個(gè)染菌玻片分別投入2個(gè)盛有5mL洗脫液中振打80次,余按4.2.3進(jìn)行。
11.2.5計(jì)算殺滅率
12.判定標(biāo)準(zhǔn)
12.1 對指示菌殺滅率≥99%判為消毒合格。
12.2 達(dá)物理學(xué)檢測標(biāo)準(zhǔn)時(shí),作為消毒合格的參考標(biāo)準(zhǔn)。
ntent="t" style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; word-wrap: break-word !important; clear: both; min-height: 1em; font-size: 20px; line-height: 20px;">液體消毒劑消毒效果評價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)
13.主題內(nèi)容與適用范圖
本方法具體規(guī)定了消毒劑清毒效果生物學(xué)檢測方法及其評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。
本方法適用于消毒劑對各種物體的消毒效果評價(jià)。
14.理化指標(biāo)
將消毒劑置20土2℃水浴中,測定在使用濃度下殺滅指示微生物達(dá)到消毒或滅菌所需的最短時(shí)間(min)。
15.指示微生物
15.1 細(xì)菌
15.1.1 細(xì)菌殖體:金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、大腸桿菌(8099或ATCC25922)。
5.1.2 細(xì)菌芽胞:枯草桿菌黑色變種芽胞(ATCC 9732)。
15.2 真菌:白色念珠菌(ATCC 10231)。
15.3 乙型肝炎表面抗原:純化抗原(1.0mg/mL)。
16. 檢測方法
16.1 中和試驗(yàn)(見附錄A)
16.2 消毒劑定性消毒試驗(yàn)(見附錄B)。
16.3 消毒劑定量消毒試驗(yàn)(見附錄C)。
16.4 消毒劑殺菌能量試驗(yàn)(見附錄D)
16.5 乙型肝炎表面抗原( HBSAg)抗原性破壞試驗(yàn)(見附錄E)。
17.消毒效果評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)
17.1 對細(xì)菌和真菌的殺滅率≥99%,對 HBSAg,將檢測方法靈敏度104倍或5X104倍(載體試驗(yàn))的HBSAg抗原性破壞,可判為消毒合格。
17.2 對枯草桿黑色變種芽胞全部殺滅,可判為滅菌合格。
17.3 在實(shí)際應(yīng)用中消毒效果評價(jià)以有機(jī)物保護(hù)試驗(yàn)的最低濃度和最短時(shí)間為該消毒劑達(dá)到實(shí)用消毒所需的濃度和時(shí)間。
附錄
來源：食品微生物檢測小編整理
