一般由五個部分組成：
高壓輸液系統(tǒng) —— 進樣系統(tǒng) —— 分離系統(tǒng)—— 檢測系統(tǒng) —— 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
一. 高壓輸液系統(tǒng)
貯液裝置、高壓輸液泵、過濾器、脫氣裝置等
1. 貯液器：貯液器用于存放溶劑。溶劑必須很純，貯液器材料要耐腐蝕，對溶劑呈惰性。貯液器應(yīng)配有溶劑過濾器，以防止流動相中的顆粒進入泵內(nèi)。溶劑過濾器一般用耐腐蝕的鎳合金制成，空隙大小一般為2mm。
2. 脫氣裝置：脫氣的目的是為了防止流動相從高壓柱內(nèi)流出時，釋放出氣泡進入檢測器而使噪聲劇增，甚至不能正常檢測。
3. 高壓輸液泵 高壓輸液泵是高效液相色譜儀的重要部件，是驅(qū)動溶劑和樣品通過色譜柱和檢測系統(tǒng)的高壓源，其性能好壞直接影響分析結(jié)果的可靠性。
對高壓泵的基本要求是：
①流量穩(wěn)定；②輸出壓力高，最高輸出壓力為50Mpa；③流量范圍寬，可在0.01～10ml／min范圍任選。④耐酸、堿、緩沖液腐蝕。⑤壓力波動小。
2. 梯度洗脫裝置 梯度洗脫是利用兩種或兩種以上的溶劑，按照一定時間程序連續(xù)或階段地改變配比濃度，以達到改變流動相極性、離子強度或pH值，從而提高洗脫能力，改善分離的一種有效方法。當一個樣品混合物的容量因子是范圍很寬，用等度洗脫時間太長，且后出的峰形扁平不便檢測時，用梯度洗脫可以改善峰形、并縮短分離時間。HPLC的梯度洗脫與GC的程序升溫相似，可以縮短分析時間，提高分離效果。使所有的峰都處于最佳分離狀態(tài)，而且峰形尖而窄。
二. 進樣器
進樣器一般要求密封性好，死體積小，重復性好，保證中心進樣，進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力和流量波動小，并便于實現(xiàn)自動化。
高壓進樣閥是目前廣泛采用的一種方式。閥的種類很多，有六通閥、四通閥，雙路閥等。以六通進樣閥最為常用。
三.分離系統(tǒng)
色譜分離系統(tǒng)包括色譜柱、固定相和流動相。色譜柱是其核心部分，柱應(yīng)具備耐高壓、耐腐蝕、抗氧化、密封不漏液和柱內(nèi)死體積小、柱效高、柱容量大、分析速度快、柱壽命長的要求。通常采用優(yōu)質(zhì)不銹鋼管制成。
色譜柱按內(nèi)徑不同可分為常規(guī)柱、快速柱和微量柱三類。
常規(guī)分析柱柱長一般為10~25cm，內(nèi)徑4 ~ 5mm，固定相顆粒直徑為 5 ~ 10 mm。為了保護分析柱不受污染，一般在分析柱前加一短柱，約數(shù)厘米長，稱為保護柱。
（微量分析柱內(nèi)徑小于l mm，凝膠色譜往內(nèi)徑3～12 mm，制備往內(nèi)徑較大，可達25 mm以上。）
四. 檢測系統(tǒng)
檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測的信號，常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學發(fā)光等。
1. 紫外可見吸收檢測器（ultraviolet－visible detector，UVD）
紫外可見吸收檢測器（UVD）是HPLC中應(yīng)用最廣泛的檢測器之一，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測器。其特點是靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對強吸收物質(zhì)檢測限可達1ng，檢測后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測器串聯(lián)使用。紫外可見檢測器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計相似，實際上就是裝有流動地的紫外可見光度計。
（1）紫外吸收檢測器：
紫外吸收檢測器常用氘燈作光源，氘燈則發(fā)射出紫外-可見區(qū)范圍的連續(xù)波長，并安裝一個光柵型單色器，其波長選擇范圍寬（190nm～800nm）。它有兩個流通池，一個作參比，一個作測量用，光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上，若兩流通池都通過純的均勻溶劑，則它們在紫外波長下幾乎無吸收，光電管上接受到的輻射強度相等，無信號輸出。當組分進入測量池時，吸收一定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強度不等，這時有信號輸出，輸出信號大小與組分濃度有關(guān)。
局限：流動相的選擇受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶劑不能做 流動相，每種溶劑都有截止波長，當小于該截止波長的紫外光通過溶劑時，溶劑的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收檢測器的工作波長不能小于溶劑的截止波長
（2）光電二極管陣列檢測器（photodiode array detector， PDAD）：
也稱快速掃描紫外可見分光檢測器，是一種新型的光吸收式檢測器。它采用光電二極管陣列作為檢測元件，構(gòu)成多通道并行工作，同時檢測由光柵分光，再入射到陣列式接收器上的全部波長的光信號，然后對二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到吸收值(A)是保留時間(tR)和波長(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時觀察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù)，從而迅速決定具有最佳選擇性和靈敏度的波長。
下圖是單光束二極管陣列檢測器的光路圖。光源發(fā)出的光先通過檢測池，透射光由全息光柵色散成多色光，射到陣列元件上，使所有波長的光在接收器上同時被檢測。陣列式接收器上的光信號用電子學的方法快速掃描提取出來，每幅圖象僅需要10ms，遠遠超過色譜流出峰的速度，因此可隨峰掃描。
圖1 二極管陣列檢測器光路圖
2．熒光檢測器（fluorescence detector， FD）
熒光檢測器是一種高靈敏度、有選擇性的檢測器，可檢測能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學衍生化生成熒光衍生物，再進行熒光檢測。其最小檢測濃度可達0.1ng／ml，適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個數(shù)量級，但其線性范圍不如紫外檢測器寬。
近年來，采用激光作為熒光檢測器的光源而產(chǎn)生的激光誘導熒光檢測器極大地增強了熒光檢測的信噪比，因而具有很高的靈敏度，在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。
3. 示差折光檢測器（differential refractive Index detector， RID）
示差折光檢測器是一種濃度型通用檢測器，對所有溶質(zhì)都有響應(yīng)，某些不能用選擇性檢測器檢測的組分，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等，可用示差檢測器檢測。示差檢測器是基于連續(xù)測定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測定樣品含量的。光從一種介質(zhì)進入另一種介質(zhì)時，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動相的折光指數(shù)不同，就可被檢測，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內(nèi)檢測器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。
4. 電化學檢測器 （elec）chemical detector， ED）
電化學檢測器主要有安培、極譜、庫侖、電位、電導等檢測器，屬選擇性檢測器，可檢測具有電活性的化合物。目前它已在各種無機和有機陰陽離子、生物組織和體液的代謝物、食品添加劑、環(huán)境污染物、生化制品、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測定中獲
得了廣泛的應(yīng)用。其中，電導檢測器在離子色譜中應(yīng)用最多。
電化學檢測器的優(yōu)點是：
①靈敏度高，最小檢測量～般為ng級，有目可達pg級；
②選擇性好，可測定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)；
③線性范圍寬，一般為4～5個數(shù)量級；
④設(shè)備簡單，成本較低；⑤易于自動操作。
5. 化學發(fā)光檢測器 （c。iluminescence detector， CD）
化學發(fā)光檢測器是近年來發(fā)展起來的一種快速、靈敏的新型檢測器，因其設(shè)備簡單、價廉、線性范圍寬等優(yōu)點。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進行化學反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學反應(yīng)，故叫作化學發(fā)光。當分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當?shù)幕瘜W發(fā)光試劑混合，引起化學反應(yīng)，導致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強度與該物質(zhì)的濃度成正比。
這種檢測器不需要光源，也不需要復雜的光學系統(tǒng)，只要有恒流泵，將化學發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學發(fā)光，通過光電倍增管將光信號變成電信號，就可進行檢測。這種檢測器的最小檢出量可達10-12g。
五. 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
早期的 HPLC 只配有記錄儀記錄色譜峰，用人工計算 A或 H。隨著計算機技術(shù)的發(fā)展，簡單的積分儀，可自動打印出 H、A和 tR，作一些簡單的計算，但不能存儲數(shù)據(jù)。
現(xiàn)在的色譜工作站功能增多，一般包括：色譜參數(shù)的選擇和設(shè)定：自動化操作儀器；色譜數(shù)據(jù)的采集和存儲，并作“實時”處理；對采集和存儲的數(shù)據(jù)進行后處理；自動打印，給出一套完整的色譜分析數(shù)據(jù)和圖譜。同時也可把一些常用色譜參數(shù)、
操作程序，及各種定量計算方法存入存儲器中，需用時調(diào)出直接使用。
